本文關鍵詞：miR-329調控E2F1對人骨肉瘤U-2OS細胞增殖及分化的影響

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【摘要】：背景和目的骨肉瘤(osteosarcoma,OS)是一種原發(fā)性惡性骨腫瘤;在兒童和青少年高發(fā),以男性多見。該病惡性程度較高,容易發(fā)生遠處轉移并且預后極差,有較高的致殘率。近年來,隨著治療方法的大幅度進展,新的輔助放化療聯(lián)合外科手術等保肢治療方法已經(jīng)逐步取代了傳統(tǒng)的截肢手術。然而,現(xiàn)代的治療方法雖然從部分程度上提高了患者的生存率,但是術后5年的生存率仍然不盡人意。對轉移和復發(fā)的患者來說,情況更不樂觀。由于化療藥物耐藥性的存在和外科手術存在一定的局限性,而骨肉瘤的確切發(fā)病機制尚未十分清楚,所以從根本上對骨肉瘤進行治療仍然是一個難題。因此,新的診斷和預后生物標志物的識別以提高骨肉瘤患者的早期診斷,改善預后是相當重要的。miRNA是一類小的非編碼RNA分子,能夠結合靶基因的3’非翻譯區(qū)域(UTR)從而發(fā)揮其調控作用。miRNA在多種生物過程中發(fā)揮作用,包括細胞分化、代謝和凋亡。近年來研究發(fā)現(xiàn),miRNA參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。miRNA已被證明在多種腫瘤中表達失調,包括卵巢癌、結腸癌、乳腺癌和食管癌等。miRNA可以作用于多種靶基因,根據(jù)靶基因的不同,其可以發(fā)揮癌基因或抑癌基因的作用。轉錄因子E2F1在細胞周期中發(fā)揮重要的調控作用。近年來,許多研究表明,E2F1在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中也參與調節(jié)并在多種癌癥中表達失調,且在骨肉瘤中表達顯示為陽性。E2F1能夠參與調節(jié)全反式維甲酸誘導的骨肉瘤分化,而miRNA對E2F1又有一定的調控作用。綜上所述,本實驗選擇miR-329作為研究基因,將miR-329轉入骨肉瘤細胞U-2OS,探討其在骨肉瘤中發(fā)生發(fā)展中的作用,為骨肉瘤的基因治療提供理論依據(jù)、為進一步的研究提供實驗基礎。方法:骨肉瘤細胞U-2OS培養(yǎng)后,實驗分3組:miR-329組,細胞轉染miR-329;陰性對照組(negative control,NC):細胞轉染無關序列;空白組(Blank):細胞僅加入轉染試劑脂質體。1.采用q RT-PCR檢測人成骨細胞h FOB1.19和骨肉瘤細胞U-2OS中miR-329和E2F1的表達水平。2.CCK-8法檢測miR-329對骨肉瘤細胞U-2OS增殖的影響。3.細胞轉染第14天,磷酸苯二鈉法檢測三組細胞內堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的活性改變;酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)檢測三組細胞內I型膠原蛋白的含量。4.Western blot檢測三組細胞內E2F1、OPN、Runx2和RARα蛋白表達水平。結果:1.骨肉瘤細胞中,miR-329的表達水平低于成骨細胞(P0.05);E2F1的表達水平高于成骨細胞(P0.05)。2.細胞轉染后,miR-329組骨肉瘤細胞的增殖水平低于空白組和陰性對照組,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05);而空白組與陰性對照組之間的細胞增殖能力相接近,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.在細胞轉染的第14天,miR-329組堿性磷酸酶的活性和I型膠原蛋白的含量高于空白組和陰性對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);空白組堿性磷酸酶的活性和I型膠原蛋白的含量與陰性對照組相接近,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。4.E2F1的蛋白表達量在miR-329組低于空白組和陰性對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);空白組與陰性對照組E2F1的蛋白表達量相接近,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。miR-329組OPN、Runx2和RARα的蛋白表達量高于空白組和陰性對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);而空白組OPN、Runx2和RARα的蛋白表達量與陰性對照組相接近,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:1.miR-329能夠通過作用于E2F1抑制骨肉瘤細胞的增殖能力,并且誘導骨肉瘤細胞的成骨分化能力。2.本實驗為骨肉瘤的基因治療提供理論依據(jù),為進一步研究提供實驗基礎。
【關鍵詞】：miR-329 E2F1 骨肉瘤 增殖 分化
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R738
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 縮略詞表11-12
• 引言12-14
• 材料和方法14-26
• 實驗結果26-32
• 討論32-36
• 小結36-37
• 參考文獻37-41
• 綜述 microRNA在骨肉瘤中的研究進展41-67
• 參考文獻58-67
• 個人簡歷及在校期間發(fā)的論文67-68
• 致謝68

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本文編號：637441