本文關鍵詞：張力負荷下CC復合體介導的RhoA信號通路對大鼠終板軟骨細胞退變的影響與作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:在體外建立大鼠終板軟骨細胞張力誘導退變模型,研究P-120catenin蛋白與RhoA/ROCK-1信號通路在體外張力誘導下終板軟骨細胞退變相互作用。方法:無菌條件下操作處理并分離大鼠腰椎部位終板軟骨,利用膠原酶以及胰酶提取終板軟骨細胞,培養(yǎng)并采用第二代終板軟骨細胞,采用FX-5000儀器施加牽張力建立終板軟骨細胞體外張力載荷模型;利用LIVE/DEAD染色方法以及流式細胞學檢測細胞的存活率和細胞凋亡;通過鬼筆環(huán)肽染色來對終板軟骨細胞的細胞骨架變化進行檢測;采用組織學染色方法檢測脊柱組織以及終板軟骨細胞的細胞外基質退變表達;同時通過RhoA/ROCK-1信號通路抑制劑以及過表達E-cadherin、P120-catenin質粒轉染對實驗進行調控檢測來抑制各個信號及蛋白基因的表達,來觀察其對終板軟骨細胞的影響;利用免疫共沉淀技術分析檢測E-cadherin和P120-catenin、P120-catenin和RhoA之間的相互偶聯(lián)作用;通過Realtime RT-PCR和Western blot檢測張力加載前后以及施加調控后的軟骨標志基因二型膠原、SOX-9、蛋白聚糖的基因和蛋白表達進行檢測;免疫熒光檢測各個蛋白在終板軟骨細胞中的定位和表達;結果:通過張力加載后,終板軟骨細胞中相關基因二型膠原、Sox9基因及蛋白聚糖的表達隨著加力的延長逐漸下調,軟骨細胞細胞外基質的合成受到明顯抑制。同時牽張力刺激能夠改變終板軟骨細胞的細胞骨架發(fā)生明顯改變,而終板軟骨細胞的凋亡則未見差異。隨著張力加載的作用下,終板軟骨細胞中RhoA/ROCK-1的基因與蛋白的表達明顯增高;抑制RhoA/ROCK-1信號通路后相關基因及蛋白表達降低,而終板軟骨細胞的退變明顯減輕。張力載荷作用下終板軟骨細胞中P120-catenin基因及蛋白水平均明顯降低,同時P120-catenin與E-cadherin蛋白之間的相互結合作用明顯降低;過表達P120-catenin蛋白后,軟骨細胞中P120-catenin基因表達顯著增高,E-cadherin的表達也明顯升高,P120-catenin和E-cadherin之間的相互結合作用也明顯升高,RhoA/ROCK-1信號通路相關蛋白表達則有顯著降低,而張力作用下的終板軟骨細胞退變狀況也明顯減輕。結論:張力載荷作用下通過激活RhoA/ROCK-1信號通路使終板軟骨細胞發(fā)生退變;同時,張力刺激還可通過抑制P120-catenin和E-cadherin之間的偶聯(lián)表達作用,使終板軟骨細胞退變加重。調控RhoA/ROCK-1信號通路及P120-catenin的表達能夠減輕終板軟骨的退變。
【關鍵詞】：間歇性循環(huán)張力 終板軟骨細胞 RhoA/ROCK-1信號通路 P120-catenin 退變
【學位授予單位】：皖南醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R681.5
【目錄】：

• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 前言12-14
• 材料（資料、內容）與方法14-35
• 1. 研究內容14-16
• 1.1 在體外建立大鼠終板軟骨細胞牽張力誘導模型15
• 1.2 觀察張力誘導前后終板軟骨細胞軟骨表型及生物學表型的改變15
• 1.3 觀察在牽張力誘導下RhoA/ROCK-1 信號通路在終板軟骨細胞中的表達和意義15
• 1.4 觀察在利用RhoA/ROCK-1 信號通路抑制劑時對牽張力下終板軟骨細胞退變的影響15-16
• 1.5 牽張力誘導前后終板軟骨細胞中P120-catenin及E-cadherin的表達及相互作用16
• 1.6 過表達P120-catenin及E-cadherin對牽張力加載前后RhoA/ROCK-1信號通路以及對終板軟骨細胞退變的影響16
• 2. 材料與方法16-34
• 2.1 實驗動物16
• 2.2 主要試劑及儀器16-19
• 2.3 建立體外大鼠終板軟骨細胞牽張力加載模型19-22
• 2.4 施加牽張力前后終板軟骨細胞活力、凋亡、細胞骨架的檢測22-23
• 2.5 細胞及椎間盤組織染色實驗23-25
• 2.6 RT-PCR法檢測終板軟骨細胞m RNA的表達25-27
• 2.7 Western blot法 （ 蛋白印記 ） 測定蛋白的表達27-30
• 2.8 RhoA的活性檢測30
• 2.9 免疫熒光及激光共聚焦檢測30-31
• 2.10 免疫共沉淀分子實驗31-32
• 2.11 過表達質粒構建實驗32-34
• 3 統(tǒng)計學處理34-35
• 本實驗技術路線圖35
• 結果35-45
• 討論45-50
• 結論50-51
• 參考文獻51-58
• 綜述58-64
• 參考文獻62-64
• 附錄64-66
• 作者簡介及讀研期間主要科研成果66-67
• 致謝67-68

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 陳露;吳小濤;王運濤;;椎間盤退變生物學治療研究進展[J];東南大學學報(醫(yī)學版);2013年04期

2 徐宏光;陳小虎;王弘;王凌挺;陳學武;;兔椎體軟骨終板血管芽增齡性變化[J];中華骨科雜志;2011年04期

  本文關鍵詞：張力負荷下CC復合體介導的RhoA信號通路對大鼠終板軟骨細胞退變的影響與作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：504555