本文關鍵詞：滑膜間充質干細胞和骨髓間充質干細胞在體內外成骨能力的比較研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討滑膜間充質干細胞(Synovial mesenchymal stem cells,SMSC)和骨髓間充質干細胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSC)在體外成軟骨、成骨潛能,評估SMSC與BMSC復合羥基磷灰石/殼聚糖/聚乳酸(hydroxylapatite/chitosan/poly L-latic acid,HA/CS/PLLA)骨修復材料在體內異位成骨能力,并比較SMSC與BMSC在體內外的成骨能力。方法:采用貼壁篩選法和酶消化法分別獲得SMSC和BMSC,利用流式細胞儀對這二種細胞進行鑒定;取二種細胞分別進行成軟骨、成骨誘導分化,利用甲苯胺藍染色(Toluidine blue staining)鑒定成軟骨分化,茜素紅染色(Alizarin Red staining)和堿性磷酸酶染色(Alkaline phosphatase staining)鑒定成骨分化;利用MTT法檢測P1、P2、P3代SMSC和BMSC細胞增殖率;取第3代SMSCs,成骨誘導1、7、14、21d后采用實時熒光定量PCR檢測成軟骨相關基因Ⅱ型膠原、蛋白聚糖,和成骨相關基因骨鈣素(osteocalcin,OCN)、Ⅰ型膠原(Collagen typeⅠ,COLⅠ)、堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)以及Runx-2 m RNA表達情況,利用Elisa法檢測成骨誘導后1、3、5、7、9和11d ALP活性,茜素紅S法檢測成骨誘導后7、14、21和28d各組鈣鹽沉積;取第3代SMSC,成骨誘導21d后利用Western-blot法檢測各組OCN和RUNX-2蛋白表達情況;體內實驗中取第3代SMSC和BMSC接種于HA/CS/PLLA支架材料植入大鼠右下肢肌袋內作為實驗組,以植入單純HA/CS/PLLA支架材料為對照組,術后8周通過X線片及組織學觀察并分析SMSC和BMSC體內成骨情況。結果:提純后SMSC和BMSC表面抗原CD90、CD105、CD147、CD44表達均超過95%,而CD34、CD117、CD14、CD45表達均低于10%;油紅O染色可見紅色脂滴形成,茜素紅染色可見紅色鈣化灶,ALP染色可見細胞質咖啡樣深染;P1代SMSC與BMSC細胞生長緩慢,呈直線性生長,P2、P3代SMSC與BMSC細胞則呈“S”形生長;SMSC和BMSC成骨誘導14d后Ⅱ型膠原、蛋白聚糖基因表達明顯增高,且SMSC組表達明顯高于BMSC組(P0.05),SMSC和BMSC成骨誘導7d后Ⅰ型膠原、ALP、OCN、Runx-2表達陽性,且BMSC表達顯著高于SMSC組(P0.05);成骨誘導3 d后ALP活性開始呈陽性,且BMSC組明顯高于SMSC組,7 d時達峰值(P0.05);而成骨誘導14 d鈣含量表達陽性,BMSC組明顯高于SMSC組,隨著誘導時間延長鈣含量逐漸增加(P0.05)。術后8周X線片顯示SMSC與BMSC組均有高密度影,灰度值分析顯示BMSC組灰度值顯著高于SMSC組;組織學結果顯示,兩組均可見新生骨形成,但BMSC組成骨量明顯多于SMSC組(P0.05)。結論:SMSC和BMSC在體內外均具有成軟骨和成骨特性,且BMSC在體內外的成骨能力均高于SMSC。
【關鍵詞】：滑膜間充質干細胞 骨髓間充質干細胞 堿性磷酸酶 骨鈣素 大鼠
【學位授予單位】：皖南醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R68
【目錄】：

• 中英文縮略詞對照表5-7
• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-14
• 研究材料（資料與內容）與方法14-30
• 1 研究內容14
• 2 實驗材料14-16
• 3 實驗方法16-29
• 3.1 原代的提取16-17
• 3.2 細胞的培養(yǎng)和傳代17
• 3.3 流式細胞儀檢測細胞表面抗原17
• 3.4 細胞的誘導分化17-18
• 3.5 MTT 法檢測各代細胞增殖率18-19
• 3.6 實時熒光定量PCR檢測相關基因的表達19-23
• 3.7 ELISA法檢測ALP活性23
• 3.8 茜素紅S法檢測鈣鹽沉積23-24
• 3.9 Western-blot法檢測OCN和RUNX-2蛋白表達24-29
• 3.10 體內實驗觀察29
• 4 統(tǒng)計學方法29-30
• 結果30-37
• 討論37-46
• 結論46-47
• 參考文獻47-52
• 綜述52-61
• 參考文獻58-61
• 作者簡介及讀研期間主要科研成果61-62
• 致謝62

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前10條

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  本文關鍵詞：滑膜間充質干細胞和骨髓間充質干細胞在體內外成骨能力的比較研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：502671