研究背景與目的下腰痛(Low back pain,LBP)極其常見,致殘率高,嚴重影響患者的生活質量。每年因LBP產生的經濟花費巨大,給家庭和社會帶來沉重負擔。目前認為,LBP的首要病因是椎間盤退變(Intervertebral disc degeneration,IDD)。IDD主要表現(xiàn)為椎間盤含水量的降低及椎間隙狹窄。椎間盤的含水量主要由聚蛋白多糖決定,而聚蛋白多糖分子的保水能力則主要依賴于其側鏈上的硫酸軟骨素(Chondroitin sulfate,CS)。CS主要由硫酸軟骨素合成酶(Chondroitin synthase,CHSY)催化合成,然而CHSY在IDD中的作用還未闡明。我們的前期結果顯示,人發(fā)生退變的椎間盤內Chsy3的表達量顯著下降,并隨著Pfirrmann退變分級的遞增其表達量遞減。由于IDD的發(fā)病機制復雜,目前缺乏能有效緩解或逆轉IDD的治療方法。因此,動物模型對深入研究IDD的機制及探索新的治療方法極其重要。然而,國際上缺乏公認有效,且能夠可控,并模擬正常退變進程的IDD動物模型。隨著CRISPR-Cas9技術和半克隆技術的出現(xiàn)及優(yōu)化,基因敲除小鼠的構建變得...

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【學位級別】：博士

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圖1人椎間盤退變時，CHSY3的表達降低（A）椎間盤退變的Pfirrmann分級。（B）椎間盤退變時硫酸軟骨素相關酶的表達變化。（C）CHSY3的表達量隨Pfirrmann分級的遞增而遞減。（t檢驗，P值＜0.05，*；P值＜0.01，**）。Figure....

圖1-2Chsy3基因sgRNA的設計的3個堿基代表PAM序列（5'-AGG-3'），而藍色的20個堿基則代表ChsyRNA序列。Figure1-2DesignofChsy3sgRNAeredbasesrepresentPAMsequ....

圖1-1Chsy3基因結構示意圖Figure1-1SchematicdiagramofgeneticstructureofChsy3hsy3基因的CRISPR-Cas9敲除質粒的構建為了達到最佳的基因敲除效果，我們選擇小鼠Chsy3基因的1號外....

圖1-3pX330-mCherry-Chsy3-sgRNA質粒示意圖Figure1-3SchematicdiagramofpX330-mCherry-Chsy3-sgRNAplasmid

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