發(fā)布時(shí)間：2024-03-30 13:20

　　[目的]本研究分為兩個(gè)部分,第一部分探討CaMKⅡ表達(dá)調(diào)控對(duì)大鼠肝胞BRL-3A凋亡的影響;第二部分探討CaMK Ⅱ表達(dá)調(diào)控對(duì)大鼠肝移植術(shù)后肝功能及細(xì)胞凋亡的影響。[方法](1)通過(guò)培養(yǎng)穩(wěn)定傳代的大鼠肝細(xì)胞BRL-3A系,并構(gòu)建CaMKⅡ γ shRNA(A組)和CaMKⅡ γ蛋白(B組)的慢病毒表達(dá)體系,轉(zhuǎn)入大鼠肝細(xì)胞BRL-3A內(nèi),同時(shí)予以灌注相應(yīng)的空白載體(C組、D組)及空白對(duì)照(E組)形成對(duì)照,通過(guò)Western blot法檢測(cè)各組CaMKⅡ、CytC、AIF蛋白的表達(dá),并通過(guò)Tunel法檢測(cè)大鼠肝細(xì)胞BRL-3A凋亡率。(2)采用經(jīng)典二袖套法建立SD至SD大鼠同種異體原位肝移植模型,分別將表達(dá)CaMKⅡγ shRNA的慢病毒載體(A組)及表達(dá)CaMKⅡγ蛋白的慢病毒載體(B組)轉(zhuǎn)染至肝移植術(shù)后大鼠體內(nèi),同時(shí)予以灌注相應(yīng)的空載體(C組、D組)及生理鹽水(E組)形成對(duì)照,分別于術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)取大鼠下腔靜脈血測(cè)定檢測(cè)各組ALT、AST水平,同時(shí)取大鼠肝組織測(cè)定CaMKⅡ、Cyt C、AIF蛋白的表達(dá)量和肝細(xì)胞凋亡率。[結(jié)果](1)在體外實(shí)驗(yàn)中,灌注CaMKⅡ γ shRNA慢病毒組...

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖..白日目.口7CC1側(cè)目曰.的.川曰MN日舊.

適當(dāng)旋松瓶蓋；??（８）置３７°Ｃ、飽和濕度、５％Ｃ０２孵箱中培養(yǎng)，傳代后的細(xì)胞在６－８ｈ便可貼壁生??長(zhǎng)，２４ｈ后更換一次培養(yǎng)液。??２．１．?４?ＢＲＬ－３Ａ細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)的研究??調(diào)整細(xì)胞密度為３２Ｘ１０１個(gè)／ｍｌ，倍比稀釋?zhuān)箓�(gè)濃度至０．?１２５Ｘ１０４個(gè)／ｍｌ，接??種到９....

圖1BRL-3A細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)增殖傳代(100X)

圖２不同接種濃度的ＢＲＬ－３Ａ細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)（ｘ±ｓ，?ｎ＝１２）??２２??

圖２不同接種濃度的ＢＲＬ－３Ａ細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)（ｘ±ｓ，?ｎ＝１２）??２２??

圖２不同接種濃度的ＢＲＬ－３Ａ細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)（ｘ±ｓ，?ｎ＝１２）??２２??

圖３?ＬＶ－ＣａＭＫ?ＩＩ?ｙ組慢病毒感染ＢＲＬ－３Ａ細(xì)胞４８ｈ綠色熒光的表達(dá)（２００Ｘ?）??

２．慢病毒滴度測(cè)定結(jié)果??將構(gòu)建好的慢病毒載體轉(zhuǎn)染２９３Ｔａ細(xì)胞，收取轉(zhuǎn)染４８ｈ后病毒上清培養(yǎng)液，??并進(jìn)行濃縮，檢測(cè)各組病毒滴度分別為：ＬＶ－ＣａＭＫｌＩｙ組慢病毒滴度＝３．８２Ｘ??１０８ｃｏｐｉｅｓ／ｍｌ；?ＬＶ－ＮＣ?組慢病毒滴度＝１．?２９Ｘ?１０８ｃｏｐｉｅｓ／ｍｌ；....

本文編號(hào)：3942416