目的:有國內(nèi)外相關(guān)研究指出:老年群體是骨科疾病的最易發(fā)群體,其中骨質(zhì)疏松和骨質(zhì)疏松引發(fā)的骨折疾病是最常見的疾病。有數(shù)據(jù)指出全球50歲以上的群體中有近15%左右的老年人患有骨質(zhì)疏松或骨折疾病,而每三十秒,就會有一例骨折患者出現(xiàn)(僅納入骨質(zhì)疏松病例);而如果將疾病調(diào)查對象轉(zhuǎn)到航天員或戰(zhàn)士等特殊職業(yè)人群,骨質(zhì)疏松和骨折的發(fā)病率則更高。面對如此高的發(fā)病率,儼然相關(guān)疾病不容被忽視。針對目前骨折愈合治療緩慢及骨質(zhì)疏松多發(fā)且治療困難等原因;設(shè)計相關(guān)實驗:篩選可調(diào)控骨形成負(fù)調(diào)控基因(CKIP-1)的小分子調(diào)控物(microRNA),在細(xì)胞和動物層次證實靶向關(guān)系及對骨形成的影響。細(xì)胞層次證實對間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)分化有調(diào)控作用;在動物層次證實對動物骨形成(骨折、骨質(zhì)疏松)有促進(jìn)作用。相關(guān)實驗的開展期望為現(xiàn)代骨科疾病的治療與康復(fù)提供新的理論依據(jù)。方法:細(xì)胞水平實驗利用生物信息學(xué)手段篩選可調(diào)控CKIP-1基因的相關(guān)miRNA并證實相關(guān)miRNA的調(diào)控作用。初步篩選了可以調(diào)控CKIP-1的幾種miRNA;之后提取了鼠股骨的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs),使用細(xì)胞侵染方法驗證let-7i-5p對BMSCs...

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1熒光檢測細(xì)胞純度（抗體CD90）

圖1.1熒光檢測細(xì)胞純度（抗體CD90）1.3.3骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)設(shè)置三個成骨分化誘導(dǎo)時間點：7、14和21天。我們先對不同誘導(dǎo)時間點的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行堿性磷酸酶染色；顯微鏡下觀測間充質(zhì)干細(xì)胞核為紅色至粉紅色，陽性顯色表現(xiàn)為藍(lán)紫色至藍(lán)黑色。比較各個誘導(dǎo)時....

圖1.2BMSCs細(xì)胞ALP染色

圖1.1熒光檢測細(xì)胞純度（抗體CD90）1.3.3骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)設(shè)置三個成骨分化誘導(dǎo)時間點：7、14和21天。我們先對不同誘導(dǎo)時間點的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行堿性磷酸酶染色；顯微鏡下觀測間充質(zhì)干細(xì)胞核為紅色至粉紅色，陽性顯色表現(xiàn)為藍(lán)紫色至藍(lán)黑色。比較各個誘導(dǎo)時....

圖1.3候選miRNA在成骨誘導(dǎo)前后的表達(dá)變化

軍事科學(xué)院碩士學(xué)位論文髓間充質(zhì)干細(xì)胞14天后，5種miRNA均有明顯的變化。其中：let-7d-5p、i-5p、miR-98-5p和miR-129-5p在成骨誘導(dǎo)之后表達(dá)發(fā)生了明顯的上升；-490-3p在成骨誘導(dǎo)之后表達(dá)發(fā)生了明顯下降。其中miR-98-5p....

圖2.1siRNA轉(zhuǎn)染效率

軍事科學(xué)院碩士學(xué)位論文2.3結(jié)果2.3.1干擾CKIP-1表達(dá)可顯著促進(jìn)BMSCs成骨分化為證實CKIP-1對BMSCs成骨過程有負(fù)調(diào)控作用，將人工合成的CKIP-1-siRNA轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。使用熒光顯微鏡來檢測細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率，結(jié)果表明轉(zhuǎn)染效率大于90%（圖....

本文編號：3942147