目的隨著細胞生物學和組織工程學的不斷發(fā)展,為治療骨缺損[1-2]開辟了新的領域。即在骨缺損處放置膜作為機械屏障,可將周圍結締組織阻擋于缺損處,產(chǎn)生特殊的再生空間,使骨生成細胞優(yōu)先生長,產(chǎn)生新骨而達到促進骨性愈合的目的,誘導膜技術也是基于這一原理。選擇理想的膜與膜下材料聯(lián)合應用修復骨缺損是關鍵。本項目擬構建生物學活性與人體骨膜相似的組織工程骨膜,即骨髓間充質干細胞(BMSCs)[3]和取健康足月孕婦羊膜制備人脫細胞羊膜(HAAM)[4]復合而成,體外觀察組織工程骨膜的生物活性,并檢測其相容性,為體內(nèi)修復大段骨缺損奠定基礎。由于大節(jié)段負重骨缺損的修復尤為困難[5],動物試驗中組織工程骨膜技術有望成為臨床治療骨缺損良方。構建的組織工程骨膜,其相關研究為骨組織工程和治療的發(fā)展提供了新的機會,逐漸成為一個熱點,為骨缺損部位制造偽骨膜提供了可能性。方法人脫細胞羊膜與家兔骨髓間充質干細胞構建組織工程骨膜的體外實驗研究。通過HE染色、掃描電鏡(SEM)下觀察人脫細胞羊膜的結構,MTT描繪出骨髓間充質干細胞在人脫細胞羊膜上的生長情況,鈣結節(jié)染色檢測(茜素紅染色、Von kossa染色)、ALP(堿性磷酸...

【文章頁數(shù)】：35 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１原代細胞

第１？２代細胞間的貼壁和生長速度無明顯區(qū)別，呈比原代更均勻的長梭形，細??胞間隔更均勻，傳至第３代時無明顯變化。其中傳代１－２天為潛伏生長期，３－６??天為對數(shù)生殖期，對數(shù)增殖期結束后進入平臺期和下降期。如圖１．２．?３所示為家??兔骨髓間充質干細胞形態(tài)學圖片。??圖１原代細胞?....

圖４骨髓間充質干細胞成骨的鑒定??

誘導至２周左右倒置相差顯微鏡下可見集落生長的細胞群體，呈漩渦團狀向??四周放射生長，形成多個分布不均、大小不一、形態(tài)各異的鈣素結節(jié)，逐漸增大，??３周后被茜素紅染成玫瑰紅色。如圖４所示成骨細胞檢測的結果。??ｕ?４ｋ．?？ｍ＂＇＇?＊?ｙ?ｘ?７＇ｍ??６?二二’?務．??ｉＴ?....

圖５人脫細胞羊膜??．

．經(jīng)物理及化學等方法處理獲得的人脫細顯示大量的粉紅色膠原細胞外基質，呈網(wǎng)狀未見有細胞形態(tài)的結構。如圖６．?７所示。??

圖７電鏡下觀察??

?圖７電鏡下觀察??兔骨髓間充質干細胞負載于人脫細胞髓間充質干細胞負載于人脫細胞羊膜（實驗增殖情況，接種后第２天細胞開始增殖，第３驗組及對照組細胞增殖速度無顯著性差異（ｐ增殖的高峰，實驗組第７天細胞達增殖高峰，３天，５天實驗組與對照組增殖細胞量的組間，對照組增殖細胞量比實驗組少；....

本文編號：3923596