目的:(1)表皮干細(xì)胞(epidermal stem cells,ESCs)的分離、培養(yǎng)和鑒定。(2)探索通過過表達(dá)細(xì)胞周期蛋白D1(CCND1)誘導(dǎo)成熟表皮細(xì)胞去分化為表皮干細(xì)胞,觀察去分化后細(xì)胞的形態(tài)、表型、增殖情況的改變。(3)探索過表達(dá)CCND1誘導(dǎo)后的表皮細(xì)胞對(duì)裸鼠皮膚創(chuàng)面修復(fù)的促進(jìn)作用。方法:(1)取包皮過長(zhǎng)病人術(shù)后的新鮮成人包皮組織,去除皮下的軟組織。分別經(jīng)分解酶(DispaseⅡ)和胰蛋白酶消化,200目濾網(wǎng)過濾。用Epilife完全培養(yǎng)基將分離的細(xì)胞重懸,接種于Ⅳ型膠原包被的培養(yǎng)瓶中。30min后換液,PBS沖洗掉尚未貼壁的表皮細(xì)胞,重新加入Epilife培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。免疫細(xì)胞熒光技術(shù)檢測(cè)該細(xì)胞的表皮干細(xì)胞抗體CK19、β1和成熟表皮細(xì)胞抗體CK10的表達(dá)情況。(2)將質(zhì)粒PEGFP-N1和細(xì)胞周期蛋白D1(CCND1)基因合成表達(dá)質(zhì)粒PEGFP-N1-CCND1,并通過Lipofectamine?2000轉(zhuǎn)染成熟表皮細(xì)胞,造成成熟表皮細(xì)胞CCND1基因過表達(dá)。設(shè)PEGFP-N1-CCND1轉(zhuǎn)染后的表皮細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組,表皮干細(xì)胞為陽性對(duì)照組,空載體PEGFP-N...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1為表皮干細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文一、表皮干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定錄下來。1.2結(jié)果1.2.1表皮干細(xì)胞的形態(tài)和生長(zhǎng)狀態(tài)觀察剛貼壁的表皮干細(xì)胞呈團(tuán)塊狀生長(zhǎng)，3-4天后團(tuán)塊開始融合連成一片。表皮干細(xì)胞胞體較小，胞核大，呈橢圓形，顏色略深。表皮干細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，25cm2培養(yǎng)瓶5-7....

圖1.2免疫細(xì)胞熒光技術(shù)檢測(cè)表皮干細(xì)胞和成熟表皮細(xì)胞的抗體β1、CK19和ck10的表達(dá)情況（標(biāo)尺為1：50μm，DAPI染核，AlexaFluor568標(biāo)記一抗）

圖1.2免疫細(xì)胞熒光技術(shù)檢測(cè)表皮干細(xì)胞和成熟表皮細(xì)胞的抗體β1、CK19和ck10的表達(dá)情況（標(biāo)尺為1：50μm，DAPI染核，AlexaFluor568標(biāo)記一抗）。A為表皮干細(xì)胞的β1免疫熒光；B為表皮干細(xì)胞的CK19的免疫熒光；C為ck10的....

圖2.1目的基因的的測(cè)序鑒定結(jié)果

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文二、過表達(dá)CCND1誘導(dǎo)成熟表皮細(xì)胞去分化為表皮干細(xì)胞查出的CCND1（基因號(hào)：BC014078）的序列一致。

圖2.2轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞的形態(tài)變化（標(biāo)尺為1：100μm）

染細(xì)胞數(shù)量的4倍，但與表皮干細(xì)胞數(shù)量相當(dāng)。表2.1培養(yǎng)5d后各組細(xì)胞的數(shù)量分組細(xì)胞的數(shù)量（×105）實(shí)驗(yàn)組陽性對(duì)照組陰性對(duì)照組24±2**6±125±2****p<0.01vs陰性對(duì)照組2.2.3細(xì)胞周期蛋白D1誘導(dǎo)去分化后表皮細(xì)胞形態(tài)變化表皮干細(xì)胞離體培....

本文編號(hào)：3899066