目的:探索SUMO1及SENP1在骨肉瘤發(fā)生發(fā)展中的作用;明確SUMO1與SENP1在骨肉瘤細胞干性維持中的作用,以及對傳統(tǒng)化療敏感性的影響;以期為骨肉瘤的治療尤其是對化療不敏感的骨肉瘤干細胞的治療提供一種新的治療策略。方法:(1)(1)收集18例骨肉瘤患者標本,分別制備提取骨肉瘤組織與鄰近腫瘤旁組織總蛋白,免疫蛋白印跡法檢測SUMO家族成員SUMO1與SENP1在骨肉瘤組織中的表達;(2)免疫蛋白印跡法檢測hFOB1.19及143B、MG-63和U-2OS中SUMO1及SENP1的表達;(3)CD133抗體標記143B細胞,流式細胞儀分選CD133⁺細胞和CD133^-細胞后將CD133⁺細胞和CD133^-細胞分別培養(yǎng),檢測SUMO1與SENP1蛋白表達差異;(4)使CD133⁺骨肉瘤干細胞分別處于細胞周期的靜止期、增殖期和衰老期,免疫印跡法檢測不同細胞周期SUMO1及SENP1蛋白表達水平及干性維持相關基因Oct4、HIF-1α及PCNA蛋白表達水平。(2)(1)RNA干擾沉...

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1SENP1骨肉瘤及骨肉瘤干細胞中的表達（A）通過蛋白質(zhì)印跡檢測SENP1，SUMO1在骨肉瘤和鄰近組織中的表達

圖1SENP1骨肉瘤及骨肉瘤干細胞中的表達（A）通過蛋白質(zhì)印跡檢測SENP1，SUMO1在骨肉瘤和鄰近組織中的表達。**與腫瘤組相比，P<0.01。（B）通過蛋白質(zhì)印跡檢測SENP1，SUMO1在具有不同分化等級的骨肉瘤細胞系中的表達。與hFOB1.19組相....

圖2SUMO1基因沉默誘導骨肉瘤干細胞經(jīng)歷快速老化，強烈抑制細胞增殖和遷移，并誘導細胞凋亡（A）在SUMO1基因沉默后檢測SUMO1的表達

19圖2SUMO1基因沉默誘導骨肉瘤干細胞經(jīng)歷快速老化，強烈抑制細胞增殖和遷移，并誘導細胞凋亡（A）在SUMO1基因沉默后檢測SUMO1的表達。（B）SUMO1基因沉默（比例尺，50μm）后骨肉瘤干細胞的克隆球形態(tài)的改變。（C）通過流式細胞術檢測的CD133+1....

圖3SENP1過表達顯著降低干性維持，但僅略微影響骨肉瘤干細胞的遷移和凋亡（A）通過蛋白質(zhì)印跡檢測SENP1基因轉導后的蛋白質(zhì)SENP1，SUMO1的表達

21圖3SENP1過表達顯著降低干性維持，但僅略微影響骨肉瘤干細胞的遷移和凋亡（A）通過蛋白質(zhì)印跡檢測SENP1基因轉導后的蛋白質(zhì)SENP1，SUMO1的表達。（B）SENP1基因轉導后的骨肉瘤干細胞的克隆球形態(tài)的改變（比例尺，50μm）。（C）在CD133+....

圖4SENP1過表達顯著增加骨肉瘤干細胞對HSVtk/GCV的體外敏感性（A）通過蛋白質(zhì)印跡檢測HSVtk基因轉導效率

天津醫(yī)科大學碩士學位論文白質(zhì)（PCNA，Oct4，HIF-1α和Akt1），腫瘤細胞遷移相關蛋白（MMP2和MMP9）和凋亡相關蛋白Caspase-3。略微增加，流式細胞凋亡顯示與單獨處理組相比，聯(lián)合處理組經(jīng)歷著輕微的細胞凋亡（圖4B-D）。與圖3F中顯示的結果類似....

本文編號：3894084