發(fā)布時間：2023-04-29 22:42

　　目的:已知高濃度利多卡因具有潛在的神經(jīng)毒性效應,擬構(gòu)建利多卡因神經(jīng)細胞毒性模型,觀察右美托咪定對高濃度利多卡因神經(jīng)細胞毒性的表觀遺傳調(diào)控與機制。方法:首先構(gòu)建體外高濃度利多卡因PC12細胞毒性模型,觀察細胞的活力。在右美托咪定與利多卡因聯(lián)合處理48 h后檢測PC12細胞活力并計算增殖抑制率,檢測細胞凋亡水平并檢測MAPK信號通路蛋白。通過文獻查閱和軟件預測miR-let-7b及其可能的靶點蛋白COL3A1,驗證二者間的關(guān)系,檢測miR-let-7b對COL3A1-3’UTR的結(jié)合情況,在利多卡因和右美托咪定聯(lián)合處理后對細胞活力,細胞增殖水平,細胞凋亡水平,細胞遷移和侵襲能力,細胞周期,調(diào)亡蛋白等進行檢測。結(jié)果:利多卡因1mM能明顯降低PC12細胞活力。右美托咪定處理過的PC12細胞能夠明顯增加細胞活力,降低增殖抑制率,抑制細胞凋亡水平,減少MAPK信號通路中的蛋白水平;右美托咪定與過表達miR-let-7b、COL3A1沉默表達均增加細胞活力、細胞侵襲和遷移能力,降低增殖抑制率,抑制細胞凋亡水平,改變細胞周期,上調(diào)Bcl-2表達,下調(diào)Caspase-3表達。結(jié)論:右美托咪定可能通過上調(diào)...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一部分 緒論
    1. 研究背景
        1.1 局麻藥與神經(jīng)毒性
        1.2 體外急性毒性藥物安全性評價模型
        1.3 可能的分子作用機制
        1.4 研究思路
        1.5 研究意義
第二部分 右美托咪定對利多卡因誘導產(chǎn)生的PC12細胞毒性的影響
    2.材料與方法
        2.1 藥品與試劑
        2.2 使用儀器
        2.3 細胞培養(yǎng)與藥物預處理
        2.4 細胞增殖水平檢測
        2.5 蛋白提取和western blotting檢測
        2.6 細胞凋亡水平檢測
        2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    3. 實驗結(jié)果
        3.1 右美托咪定對PC12細胞的安全用藥濃度范圍探索
        3.2 右美托咪定對利多卡因預處理后PC12細胞活力的影響
        3.3 右美托咪定對利多卡因預處理后PC12細胞凋亡水平的影響
        3.4 右美托咪定和利多卡因共同作用下對MAPK信號通路相關(guān)蛋白的影響
    4. 討論
第三部分 miR-let-7b在右美托咪定減緩利多卡因誘導PC12細胞毒性效應的作用
    2. 材料與方法
        2.1 藥品與試劑
        2.2 使用儀器
        2.3 microRNA預測
        2.4 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.5 細胞培養(yǎng)與藥物處理
        2.6 雙熒光素酶報告基因檢測
        2.7 RNA抽提和Real-time RT-PCR檢測
        2.8 蛋白提取和western blotting檢測
        2.9 PC12細胞平板克隆形成實驗
        2.10 流式細胞術(shù)Edu染色增殖檢測
        2.11 Hoechest33258染色檢測細胞增殖
        2.12 流式細胞術(shù)細胞凋亡檢測
        2.13 細胞遷移與細胞侵襲能力檢測
        2.14 流式細胞術(shù)細胞周期檢測
        2.15 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    3. 實驗結(jié)果
        3.1 miR-let-7b及COL3A1在利多卡因和右美托咪定聯(lián)合給藥處理的PC12中的表達情況
        3.2 驗證miR-let-7b對COL3A1的調(diào)控作用
        3.3 右美托咪定對利多卡因誘導的PC12細胞毒性的保護作用的分子機制研究
    4. 討論
第四部分 結(jié)論
參考文獻
在學期間發(fā)表論文
致謝



本文編號：3805887