【背景】嚴重創(chuàng)傷等引起的大段骨缺損的治療一直是骨科臨床上的難題。組織工程骨的迅速發(fā)展為大段骨缺損的治療提供了一種可行的方案。然而,目前組織工程骨(TEB)并沒有廣泛應用于臨床大段骨缺損的治療,主要因為植入體內(nèi)的組織工程骨缺乏血管和神經(jīng)的支配,致使組織工程骨體內(nèi)成骨效果不佳。課題組前期在動物實驗研究中發(fā)現(xiàn)感覺神經(jīng)束植入組織工程骨可以顯著促進組織工程骨成骨。然而目前感覺神經(jīng)促組織工程骨成骨的體外細胞學機制并不明確�！灸康摹�1.探究感覺神經(jīng)促進組織工程骨成骨的體外細胞學機制;2.探究共培養(yǎng)體系中背根神經(jīng)節(jié)(DRG)對骨髓間充質干細胞(BMSCs)增殖分化的影響;3.探究共培養(yǎng)體系中DRG對BMSCs作用的內(nèi)在機制�！痉椒ā�1.通過全骨髓沖洗貼壁培養(yǎng)法提取BMSCs,并從細胞形態(tài)、多向分化潛能、特異性CD分子三方面鑒定提取的BMSCs;2.Transwell共培養(yǎng)體系的構建。取新生SD大鼠背根神經(jīng)節(jié)(DRG)與綠色熒光大鼠骨髓間充質干細胞BMSCs構建Transwell共培養(yǎng)體系。實驗組為DRG與BMSCs Transwell共培養(yǎng)(可表示為DRG+BMSCs組),DRG神經(jīng)細胞位于Trans...

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學位級別】：博士

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縮略語表
中文摘要
ABSTRACT
前言
文獻回顧
    1.組織工程骨研究現(xiàn)狀和制約因素
    2.周圍神經(jīng)(尤其是感覺神經(jīng)和交感神經(jīng))對骨組織生理病理過程的影響
    3.感覺神經(jīng)和交感神經(jīng)在軟骨生理和發(fā)育中的作用
    4.感覺神經(jīng)和交感神經(jīng)在骨關節(jié)炎病理中的作用
    5.骨組織中感覺神經(jīng)和交感神經(jīng)的支配
    6.骨組織中感覺神經(jīng)肽和兒茶酚胺及其受體對骨重建及骨代謝的作用
    7.本課題組前期的研究基礎
1 材料
    1.1 實驗動物
    1.2 實驗儀器和器械
    1.3 實驗試劑
    1.4 PCR引物
2 方法
    2.1 GFP大鼠BMSCs的分離提取培養(yǎng)
    2.2 SD大鼠籽鼠DRG的提取與處理
    2.3 DRG與 GFP-BMSCs共培養(yǎng)的方法
    2.4 流式細胞檢測
    2.5 BMSCs成骨誘導及茜素紅染色
    2.6 BMSCs成脂誘導和油紅O染色
    2.7 BMSCs成軟骨誘導和阿利辛藍染色
    2.8 CCK8 檢測細胞增殖
    2.9 克隆形成實驗(CFU)
    2.10 RT-PCR
    2.11 蛋白電泳檢測(Western blot)
    2.12 免疫熒光染色及觀察
    2.13 透射電鏡觀察自噬變化
    2.14 藥物處理
    2.15 統(tǒng)計學分析
3 結果
    3.1 綠色熒光BMSCs和背根神經(jīng)節(jié)細胞的培養(yǎng)
    3.2 GFP-BMSCs的鑒定
    3.3 DRG與 BMSCs共培養(yǎng)對BMSCs黏附的影響
    3.4 DRG與 BMSCs共培養(yǎng)促進BMSCs的增殖和三向分化潛能的維持
    3.5 DRG與 BMSCs共培養(yǎng)促進BMSCs的克隆形成能力和干性基因的表達
    3.6 DRG與 BMSCs共培養(yǎng)可提高BMSCs的自噬水平
    3.7 共培養(yǎng)過程中BMSCs內(nèi) AMPK/mTOR信號通路被激活
    3.8 Compound C可降低共培養(yǎng)體系中BMSCs的自噬水平和干性基因的表達量
    3.9 Compound C單獨作用對BMSCs自噬和干性基因表達無影響
    3.10 NK1R特異性抑制劑阿瑞匹坦可降低共培養(yǎng)體系中BMSCs的自噬水平和干性基因表達量
4 討論
    4.1 共培養(yǎng)體系中DRG促進BMSCs的增殖與三向分化潛能的維持
    4.2 共培養(yǎng)體系中BMSCs除成骨、成脂、成軟骨分化潛能增強外,其他方向分化潛能也可能增強
    4.3 共培養(yǎng)體系中DRG通過增強BMSCs自噬水平維持BMSCs干性
    4.4 共培養(yǎng)體系中AMPK/mTOR信號通路介導了BMSCs自噬增強
    4.5 共培養(yǎng)體系中DRG分泌的SP對 BMSCs自噬和干性維持起到重要作用
    4.6 BMSCs旁分泌功能及共培養(yǎng)體系的中DRG與 BMSCs動態(tài)相互作用的觀點
    4.7 本研究對于組織工程骨構建的意義
小結
參考文獻
研究成果
致謝



本文編號：3776586