發(fā)布時間：2022-10-04 17:00

　　研究目的:運動神經(jīng)元損傷或者退行性病變是運動神經(jīng)元疾病或者脊髓損傷常見的病理特征。移植運動神經(jīng)元被認為是一種有望促進脊髓功能恢復的治療手段。之外,獲得運動神經(jīng)元疾病患者的特異性運動神經(jīng)元可作為疾病模型研究運動神經(jīng)元疾病的發(fā)病機制、篩選和評估新的治療藥物等。然而目前缺乏一種高效、安全地獲得運動神經(jīng)元的方法。本研究篩選小分子化合物誘導體細胞直轉(zhuǎn)分化運動神經(jīng)元。方法:根據(jù)對運動神經(jīng)元發(fā)育過程的認識,選擇一些小分子化合物,采取不同的小分子組合來誘導人星形膠質(zhì)細胞HA1800。通過細胞形態(tài)、免疫熒光染色、基因表達和電生理等鑒定誘導的細胞是否具有神經(jīng)元的形態(tài)和運動神經(jīng)元的表型以及電生理特性,并識別有效的小分子化合物組合。進一步研究有效的小分子組合能否誘導小鼠脊髓星形膠質(zhì)細胞、人和小鼠的成纖維細胞、人骨髓間充質(zhì)干細胞轉(zhuǎn)分化為運動神經(jīng)元。最后,探索小分子在體內(nèi)能否誘導產(chǎn)生運動神經(jīng)元。將小分子包含在beads內(nèi),移植到小鼠背部皮下或者大鼠坐骨神經(jīng)周圍,通過免疫熒光分析小分子能否誘導beads周圍的細胞轉(zhuǎn)分化運動神經(jīng)元。結(jié)果:篩選出五個小分子化合物的組合,它能夠?qū)⑷诵切文z質(zhì)細胞高效、快速、直接轉(zhuǎn)分化為運動... 

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語/符號說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、小分子化合物誘導人和小鼠星形膠質(zhì)細胞轉(zhuǎn)分化為運動神經(jīng)元
    1.1 對象和方法
        1.1.1 主要儀器和耗材
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 主要細胞和動物
        1.1.4 主要溶液、緩沖液、培養(yǎng)基配置
        1.1.5 人正常星形膠質(zhì)細胞的傳代培養(yǎng)、凍存和鑒定
        1.1.6 神經(jīng)球形成實驗
        1.1.7 流式細胞儀檢測
        1.1.8 小分子化合物誘導HA1800向運動神經(jīng)元轉(zhuǎn)分化
        1.1.9 共聚焦時序拍照
        1.1.10 采用差速貼壁法分離、培養(yǎng)新生大鼠成肌細胞
        1.1.11 成肌細胞誘導分化和誘導的運動神經(jīng)元共培養(yǎng)
        1.1.12 膜片鉗技術(shù)檢測誘導神經(jīng)元的神經(jīng)電生理活動
        1.1.13 小分子誘導ALS模型小鼠脊髓星形膠質(zhì)細胞
        1.1.14 細胞免疫熒光分析
        1.1.15 細胞總RNA提取
        1.1.16 RealtimePCR反應(yīng)
        1.1.17 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計學分析
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 人星形膠質(zhì)細胞HA1800鑒定
        1.2.2 篩選小分子化合物誘導HA1800向運動神經(jīng)元轉(zhuǎn)分化
        1.2.3 小分子化合物誘導神經(jīng)元的過程并不經(jīng)歷增殖的神經(jīng)干/祖細胞中間狀態(tài)
        1.2.4 小分子誘導星形膠質(zhì)細胞基因表達發(fā)生明顯改變
        1.2.5 誘導運動神經(jīng)元的具有神經(jīng)元電生理活動特征
        1.2.6 誘導的神經(jīng)元控制肌管的收縮
        1.2.7 小分子化合物誘導ALS模型小鼠脊髓星形膠質(zhì)細胞變成運動神經(jīng)元
    1.3 討論
    1.4 小結(jié)
二、小分子化合物誘導人和小鼠成纖維細胞轉(zhuǎn)分化為運動神經(jīng)元
    2.1 對象和方法
        2.1.1 主要儀器和耗材
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要細胞和動物
        2.1.4 主要溶液、緩沖液和培養(yǎng)基配置
        2.1.5 成人皮膚成纖維細胞(HSF)分離、培養(yǎng)
        2.1.6 小鼠胚胎成纖維細胞(Mouseembryonicfibroblasts,MEF)分離、培養(yǎng)
        2.1.7 小分子化合物誘導人胚肺成纖維細胞轉(zhuǎn)分化為運動神經(jīng)元
        2.1.8 小分子化合物誘導新生兒皮膚成纖維細胞和成人皮膚成纖維細胞
        2.1.9 小分子誘導小鼠胚胎成纖維細胞向運動神經(jīng)元分化
        2.1.10 細胞免疫熒光
        2.1.11 細胞總RNA提取
        2.1.12 RealtimeqPCR分析
        2.1.13 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計學分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 鑒定人胚肺成纖維細胞IMR-90的表型
        2.2.2 小分子化合物誘導IMR-90變成運動神經(jīng)元
        2.2.3 小分子誘導人胚肺成纖維細胞轉(zhuǎn)分化為運動神經(jīng)元不經(jīng)歷神經(jīng)干/祖細胞中間狀態(tài)
        2.2.4 小分子誘導人胚肺成纖維細胞的基因表達發(fā)生改變
        2.2.5 小分子化合物誘導新生兒皮膚成纖維細胞和成人皮膚成纖維細胞轉(zhuǎn)分化為運動神經(jīng)元
        2.2.6 小分子化合物誘導小鼠胚胎成纖維細胞變成運動神經(jīng)元
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
三、小分子化合物誘導人骨髓間充質(zhì)干細胞轉(zhuǎn)分化為運動神經(jīng)元
    3.1 對象和方法
        3.1.1 主要儀器和耗材
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要的細胞
        3.1.4 主要溶液、緩沖液、培養(yǎng)基配置
        3.1.5 人骨髓間充質(zhì)干細胞表面分子表達鑒定
        3.1.6 流式細胞儀檢測HBMSC的表面抗原
        3.1.7 HBMSC的體外分化鑒定
        3.1.8 小分子化合物誘導人骨髓間充質(zhì)干細胞轉(zhuǎn)分化為運動神經(jīng)元
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 HBMSC的表型和體外分化鑒定
        3.2.2 小分子化合物誘導HBMSC直接轉(zhuǎn)分化為運動神經(jīng)元
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
四、小分子化合物體內(nèi)誘導細胞表達運動神經(jīng)元標志物
    4.1 對象和方法
        4.1.1 主要儀器和耗材
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要細胞和動物
        4.1.4 主要溶液、緩沖液、培養(yǎng)基配置
        4.1.5 小分子在體誘導細胞轉(zhuǎn)分化實驗
        4.1.6 組織切片和免疫熒光檢測
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 小分子化合物在體內(nèi)誘導小鼠皮下組織細胞表達運動神經(jīng)元的標志物
        4.2.2 小分子化合物體內(nèi)誘導坐骨神經(jīng)周圍細胞表達運動神經(jīng)元的標志物
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
全文結(jié)論
論文創(chuàng)新點
參考文獻
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述
    綜述參考文獻
致謝
個人簡歷



本文編號：3685417