研究目的:研究探討人體肌動(dòng)蛋白家族成員Homo sapiens kinesin family member21B（KIF21B）基因在骨肉瘤的增殖及遷移這兩個(gè)進(jìn)程當(dāng)中起到的作用。方法:首先在培養(yǎng)的HOS,Saos-2,U-2 OS三個(gè)常用骨肉瘤細(xì)胞系中應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）方法檢測KIF21B基因的表達(dá)豐度ACT以驗(yàn)證其在骨肉瘤中的異常過度表達(dá)。隨后以KIF21B基因?yàn)槟０?設(shè)計(jì)RNA干擾靶點(diǎn)序列,構(gòu)建目的基因RNA干擾慢病毒載體并包裝（shRNA慢病毒）。對體外培養(yǎng)的U-2 OS細(xì)胞進(jìn)行shRNA慢病毒感染達(dá)到敲除實(shí)驗(yàn)組KIF21B基因的目的,并檢測其中目標(biāo)基因的敲除率（實(shí)驗(yàn)中敲除率達(dá)到74.9%）,檢測合格的細(xì)胞分入實(shí)驗(yàn)組shK][F21B組（正常目的細(xì)胞,加入shRNA病毒感染的細(xì)胞組）并引入另一組對照組shCtrl組（正常目的細(xì)胞,陰性對照病毒感染的細(xì)胞組）。將兩組細(xì)胞培養(yǎng)后分別進(jìn)行Western blot試驗(yàn)驗(yàn)證靶點(diǎn)的有效性,然后進(jìn)行Ciligo細(xì)胞計(jì)數(shù)、MTT細(xì)胞活力檢測、細(xì)胞周期分析及細(xì)胞凋亡檢測,比較兩組實(shí)驗(yàn)結(jié)果以探究KIF21B基因在骨肉瘤細(xì)胞增殖中的作用。同... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－２：兩組感染細(xì)胞在培養(yǎng)７２小時(shí)后，用顯微鏡進(jìn)行觀察

?第３章結(jié)果???表３－２及圖３－３：使用ｑＰＣＲ實(shí)驗(yàn)中２＾＾１方法測算實(shí)驗(yàn)組及對照組目的基因表達(dá)豐度。對照??組ｓｈＣｔｒｌ中樣本２＿ＡＡＣｔ均值為］．００２±０．０７４，大于實(shí)驗(yàn)組的０．０２５１?土０．０７４，經(jīng)兩組配對ｔ檢驗(yàn)（樣??本量為３），兩組間在統(tǒng)計(jì)學(xué)上存在明顯差異（＊＊Ｐ＝０．０００２＜０．０１）�？梢妰山MＡＣｔ值結(jié)果中??實(shí)驗(yàn)組大于對照組。將２－ＡＡＣｔ平均值代入計(jì)算公式（ｓｈＣｔｒＩ－ｓｈＫＩＦ２１Ｂ）?／ｓｈＣｔｒｌ計(jì)算得到目的??基因敲減效率約為７４．９％。??Ｔａｂｌｅ?３－２?ａｎｄ?ｆｉｇｕｒｅ?３－３：?ｕｓｅ?ｔｈｅ?２＂ＡＡＣｔ?ｍｅｔｈｏｄ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｑＰＣＲ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ?ｔｏ?ｍｅａｓｕｒｅ?ｔｈｅ?ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ??ｇｅｎｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ａｂｕｎｄａｎｃｅ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ?ｇｒｏｕｐ?ａｎｄ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ．?Ｔｈｅ?ｍｅａｎ?２＿ＡＡａｖａｌｕｅ?ｏｆ??ｓａｍｐｌｅ?ｉｎ?ｓｈＣｔｒｌ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ?ｗａｓ?１．００２土０．０７４，?ｇｒｅａｔｅｒ?ｔｈａｎ?ｔｈａｔ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ??ｇｒｏｕｐ，?ｗｈｉｃｈ?ｗａｓ?０．０２５１?±０．０７４．?Ａｆｔｅｒ?ｔｈｅ?ｔ－ｔｅｓｔ?ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｔｗｏ?ｇｒｏｕｐｓ?（ｎ＝３），?ｔｈｅｒｅ?ｗａｓ?ａ??ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ｔｈｅ?ｔｗｏ?ｇｒｏｕｐｓ?（＊＊Ｐ＝０．０００２＜０．０】）．?Ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｔｗｏ


本文編號：3494359