本文關鍵詞：肽基凝膠誘導NT-3基因修飾BMSCs向神經細胞分化研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的:構建體外脊髓組織工程模塊,探討在含IKVAV肽基凝膠三維培養(yǎng)下,NT-3基因修飾的BMSCs向神經細胞分化情況。研究方法:1、采用全骨髓貼壁法分離、培養(yǎng)細胞,進行形態(tài)學觀察、流式細胞術表面抗原檢測、觀察其向成脂方向誘導分化,CCK-8繪制細胞生長曲線。2、使用NT-3過表達腺病毒(Ad-NT-3-RFP)對BMSCs進行基因修飾,48h后熒光顯微鏡下觀察標記蛋白RFP在轉染后BMSCs中表達情況,ELISA法檢測修飾后BMSCs NT-3蛋白表達情況。3、通過含細胞的培養(yǎng)液促發(fā)多肽溶液自組裝形成三維培養(yǎng)體系,實驗分成三組:凝膠-NT3組(經NT-3病毒轉染后三維培養(yǎng))、凝膠-RFP組(經RFP對照病毒轉染后三維培養(yǎng))、NT-3組(只經NT-3病毒轉染)。運用qRT-PCR及Western blot檢測各組BMSCs細胞中MAP-2、GFAP mRNA及蛋白表達水平。研究結果:1、分離獲取的BMSCs呈梭行,流式細胞測定顯示細胞高表達CD29,不表達CD34,經成脂誘導2周出現脂滴,油紅O染色成紅色。2、使用Ad-NT-3-RFP轉染BMSCs 48h后,細胞中出現明顯的RFP表達,細胞轉染效率均在90%以上。ELISA檢測細胞培養(yǎng)液中NT-3含量,細胞液中第1天就開始出現NT-3蛋白,第3天NT-3蛋白濃度明顯升高。到第5天后,每天培養(yǎng)液中NT-3蛋白濃度未出現明顯差異。3、qRT-PCR和Western blot結果顯示:凝膠-NT3組中MAP-2、GFAP mRNA及蛋白表達水平較凝膠-RFP組和NT-3組明顯增高,差異有統計學意義(P0.05)。結論:含IKVAV肽基凝膠具有明顯誘導NT-3基因修飾的BMSCs向神經細胞分化的作用。
【關鍵詞】：組織工程模塊 BMSCs NT-3 IKVAV 肽基凝膠 神經分化
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R651.2
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 中英文縮略詞表8-9
• 第1章 前言9-11
• 第2章 材料與方法11-23
• 2.1 材料11-14
• 2.1.1 SD大鼠11
• 2.1.2 細胞11
• 2.1.3 腺病毒來源11
• 2.1.4 多肽來源11
• 2.1.5 主要試劑和實驗設備11-13
• 2.1.6 主要溶液的配制13-14
• 2.2 實驗方法14-23
• 2.2.1 BMSCs分離及培養(yǎng)14
• 2.2.2 骨髓間充質干細胞鑒定14-15
• 2.2.3 細胞生長曲線測定（CCK-8）比色法15-16
• 2.2.4 腺病毒轉染BMSCs及相關蛋白檢測16-17
• 2.2.5 脊髓組織工程模塊構建及細胞分化檢測17-21
• 2.2.6 統計學處理21-23
• 第3章 實驗結果23-30
• 3.1 BMSCs的培養(yǎng)與傳代23-24
• 3.2 流式細胞儀檢測BMSCs表面標記抗原CD29、CD34的表達24
• 3.3 BMSCs的成脂誘導和油紅染色結果24-25
• 3.4 BMSCs生長曲線25
• 3.5 病毒轉染后紅色熒光蛋白表達情況25-26
• 3.6 ELISA檢測轉染后BMSCs NT-3表達情況26
• 3.7 多肽分子檢測及自組裝結果26-27
• 3.8 BMSCs神經分化檢測27-30
• 3.8.1 BMSCs形態(tài)學觀察27-28
• 3.8.2 BMSCs神經分化后神經標志物q RT-PCR結果28-29
• 3.8.3 BMSCs神經分化后神經標志物Western-Blot結果29-30
• 第4章 討論30-34
• 第5章 結論與展望34-35
• 5.1 結論34
• 5.2 展望34-35
• 致謝35-36
• 參考文獻36-38
• 攻讀學位期間的研究成果38-39
• 綜述 脊髓組織工程研究進展39-48
• 參考文獻45-48

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