目的:基礎疾病、手術創(chuàng)傷和術中體位改變等會對患者生理功能造成不同程度的影響,病人圍術期極易發(fā)生心腦脆弱器官的缺血/再灌注損傷,并且術中呼吸和循環(huán)系統(tǒng)的穩(wěn)定直接影響病人術后恢復,因此如何保證患者圍術期安全,預防圍術期不良事件的發(fā)生是麻醉醫(yī)生面臨的重大挑戰(zhàn)。LOC339524是課題組于2012年在研究人心臟早期停跳灌流液的蛋白質(zhì)組學時通過高效液相色譜-芯片/質(zhì)譜（High performance liquid chromatography-chip/mass spectrometry,HPLC-Chip/MS）技術分離、鑒定的新蛋白,隨后制備了單克隆抗體5-D3。前期研究發(fā)現(xiàn)LOC339524可能參與了胚胎期大鼠心臟的發(fā)育,并且能調(diào)控H9C2心肌細胞的分裂增殖。除此之外,課題組前期研究還證實LOC339524參與大腦炎癥的調(diào)控,其高表達可以明顯減輕脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）導致的小膠質(zhì)細胞炎癥反應。這些均提示LOC339524具有重要的功能,可能參與器官保護。但LOC339524在心肌缺血/再灌注損傷中的作用和機制尚不清楚,并且其減輕BV-2小膠質(zhì)細胞炎癥反應的... 

【文章來源】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學重慶市

【文章頁數(shù)】：143 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

LOC339524是一個由注釋為LncRNA的基因編碼的蛋白(A)WesternBlot檢測LOC339524蛋白的外源性表達情況

圖 2 缺氧可以誘導 LOC339524 的表達并分泌至胞外(A）和（B）生物信息學對 LOC339524 蛋白信號肽的預測。(C)RT-qPCR 檢測細胞置于 1%O2環(huán)境中 24h 對 LOC339524 mRNA 的影響。(D) RT-qPCR 檢測 CoCl2模擬的缺氧環(huán)境對 LOC339524mRNA 的影響。(E) RT-qPCR 檢測 SD 大鼠缺氧 0-72h 后心肌組織中 LOC339524 mRNA 的變化。（F）Western Blot 分析常氧和 1%O2對LOC339524蛋白胞質(zhì)和胞核定位及表達量的影響。（G）Western Blot分析 SD 大鼠缺氧 0-72h 后心肌組織和血清外泌體中 LOC339524 蛋白的變化。（*p<0.05）2.2.3 LOC339524 不受無義介導的 mRNA 降解（Nonsense-Mediated mRNA Decay，NMD）途徑調(diào)控NMD被認為是基因轉錄后調(diào)控的重要途徑，在所有的真核細胞中都可以發(fā)揮功能，如真菌，植物，脊椎動物中等，可以保證蛋白翻譯在正確的終止密碼子處停止。作為一種mRNA質(zhì)量控制途徑，可識別并降解含有提前終止密碼子(prematuretermination codons，PTC ) 的異常mRNA，避免截短蛋白( truncated protein)積累[57]。目

圖 3 慢病毒介導的 UPF1/Rent1 過表達穩(wěn)轉細胞株鑒定(A）PCR 擴增 UPF1 基因。（B）UPF1 基因亞克隆。(C)載體的 BamH I+Xho I 雙酶切鑒定。（D）~（G）依次分別 Western Blot 對 H9C2，AC16，HMO6 和 LO2 細胞高表達 UPF1/Rent1 后 UPF1/Rent1蛋白的表達情況及其統(tǒng)計分析。（*p<0.05，**p<0.01）2.2.3.2 siUPF1 沉默 UPF1/Rent1 最佳片段、時間和濃度的篩選將三條 siUPF1 片段（siUPF1-001，siUPF1-002，siUPF1-003）以 50nmol/L 轉染 H9C2細胞，對照組轉染相同濃度的無關片段（siNC）48h 后提取蛋白，Western Blot 檢測UPF1/Rent1 的表達。結果發(fā)現(xiàn)，siUPF1-001 沉默 UPF1/Rent1 的效果最好，可沉默約61.97%（0.902 0.2 vs.0.343 0.081，p=0.004），故后續(xù)選用 siUPF1-001（Fig 4A）。將 50nmol/L，100nmol/L 和 200nmol/L 的 siUPF1-001 轉染 H9C2 細胞，對照組轉染相同濃度的 siNC，與 24h，48h 和 72h 分別提取蛋白，Western Blot 檢測 UPF1/Rent1 的表達。結果發(fā)現(xiàn)，100nmol/L 作用 48h 沉默 UPF1/Rent1 的效果最好，可達 82.47%（0.972 0.120vs.0.126 0.075，p=0.000）（Fig 4B）。將篩選到的 100nmol/L siUPF1-001 轉染 AC16，

【參考文獻】：
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本文編號：3429403