本文關(guān)鍵詞：AKT信號通路在機械循環(huán)壓力作用下對終板軟骨退變的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:在體外大鼠終板軟骨細胞培養(yǎng)基礎(chǔ)上,建立終板軟骨細胞在間歇循環(huán)牽張力作用下退變的細胞模型,然后在進一步研究AKT/m TOR信號通路對大鼠終板軟骨細胞退變的影響。方法:在實驗室于無菌的條件下分離、培養(yǎng)大鼠的終板軟骨細胞,然后選擇第二代大鼠終板軟骨細胞作為實驗所用的細胞。建立終板軟骨細胞在FX5000-T細胞應力加載系統(tǒng)作用下的軟骨細胞退變的模型。具體實驗分組為:空白對照組(P2代細胞);實驗組1:FX5000-T間歇循環(huán)牽張力組;實驗組2:FX5000-T間歇循環(huán)牽張力及AKT/mTOR細胞信號通路抑制劑組。甲苯胺藍染色法檢測各組終板軟骨細胞蛋白聚糖的變化;倒置相差顯微鏡觀察各組終板軟骨細胞的形態(tài)學變化;免疫印跡法檢測AKT、P-AKT以及位于AKT下游的蛋白質(zhì)表達情況;實時聚合酶鏈反應檢測各組細胞中SOX-9、蛋白聚糖、Ⅱ型膠原以及細胞細胞基質(zhì)分解代謝基因MMP-3、MMP-13、Adamts-5等相關(guān)基因的表達。結(jié)果:大鼠的終板軟骨細胞在間歇循環(huán)牽張力作用下,隨著FX5000-T細胞應力加載系統(tǒng)作用時間的進行,大鼠的終板軟骨細胞中軟骨標志物:SOX9、二型膠原、蛋白聚糖基因的表達逐漸降低,隨后又逐漸增高;提示剛開始大鼠終板軟骨細胞的細胞外基質(zhì)合成在剛開始時受到了抑制。在機械循環(huán)牽張力的作用下,大鼠的終板軟骨細胞中的軟骨細胞的基因標志物及AKT/m TOR信號通路的關(guān)鍵的基因以及相關(guān)蛋白的表達逐漸降低;抑制AKT/mTOR信號通路后,大鼠軟骨細胞的基因標志物的表達明顯降低,AKT/mTOR信號通路的相關(guān)基因及相關(guān)蛋白的表達也明顯降低,提示大鼠終板軟骨細胞退變的程度明顯加重。結(jié)論:間歇循環(huán)牽張力載荷通過激活AKT/mTOR/P70S6K細胞信號通路,進而誘導大鼠終板軟骨細胞的退變。AKT/m TOR/P70S6K信號通路可能在大鼠終板軟骨細胞于體外間歇循環(huán)牽張力作用下退變的過程中發(fā)揮重要的作用,人為的調(diào)控或干預AKT/mTOR/P70S6K信號通路的表達可能減緩,或者抑制大鼠終板軟骨的退變。
【關(guān)鍵詞】：椎間盤 終板軟骨細胞 AKT/m TOR/P70S6K 細胞退變
【學位授予單位】：皖南醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R681.5
【目錄】：

• 中英文縮寫、略寫詞對照表5-9
• 摘要9-10
• ABSTRACT10-12
• 前言12-15
• 研究材料（資料、內(nèi)容）和方法15-29
• 1. 實驗研究內(nèi)容15-16
• 1.1 建立終板軟骨細胞在體外機械循環(huán)牽張力作用下退變的模型15
• 1.2 觀察機械循環(huán)張力加載前后終板軟骨細胞的生物學表型改變15
• 1.3 AKT/mTOR信號通路在牽張力誘導終板大鼠軟骨細胞退變過程中的作用15-16
• 1.4 抑制AKT/mTOR信號通路后，觀察該信號通路在機械循環(huán)牽張力誘導下對大鼠終軟骨細胞退變的影響16
• 2. 實驗材料和實驗方法16-28
• 2.1 實驗動物16
• 2.2 主要實驗試劑及實驗儀器16-18
• 2.3 建立大鼠終板軟骨細胞體外機械循環(huán)牽張力誘導模型18-21
• 2.4 AKT/mTOR信號通路抑制試驗21
• 2.5 機械循環(huán)牽張力作用前后對終板軟骨細胞增殖、凋亡的檢測21-23
• 2.6 細胞的甲苯胺藍染色實驗23
• 2.7 Real time RT-PCR法檢測mRNA的表達23-26
• 2.8 Western blot法測定蛋白質(zhì)的表達26-28
• 3 統(tǒng)計學處理28-29
• 結(jié)果29-38
• 討論38-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻46-55
• 綜述：AKT/m TOR/P70S6K 信號通路在軟骨分化及發(fā)育中的研究進展55-64
• 參考文獻60-64
• 附錄64-67
• 作者簡介及相關(guān)科研成果67-68
• 致謝68-69

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