本文關鍵詞：七氟烷對大鼠胚胎神經(jīng)干細胞的活性、增殖、分化的影響及其可能機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討不同濃度七氟烷對大鼠胚胎神經(jīng)干細胞(Fetal neural stem cells,FNSC)的活性、增殖及分化的影響,并初步探索其機制,為臨床上七氟烷運用的選擇和管理提供一定的指導意義。方法購得Invitrogen公司從胚胎14天SD大鼠皮層中取出的神經(jīng)干細胞,使用神經(jīng)干細胞完全無血清培養(yǎng)基(serum free medium,SFM)進行培養(yǎng),所有實驗均選用第2-4代FNSC進行,選用胚胎神經(jīng)干細胞標記物Nestin以及Sox2進行免疫熒光鑒定,可知培養(yǎng)的第4代FNSC未分化表型仍維持在90%以上。1.單層貼壁培養(yǎng)FNSC,隨機分為4組:空白對照組(C組),即單純吸入21%O2,5%CO2以及平衡N2未吸入七氟烷組;根據(jù)吸入七氟烷濃度不同,實驗組分為:低濃度七氟烷組(SL組,吸入1.2%即0.5MAC七氟烷);中濃度七氟烷組(SM組,吸入2.4%即1MAC七氟烷);以及高濃度七氟烷組(SH組,吸入4.8%即2MAC七氟烷)。以上4組FNSC于處理6h,12h及24h后用MTT方法檢測FNSC活細胞數(shù)的變化。2.利用Annexinn V/PI流式細胞術檢測SH組處理不同時間(6h,12h,24h)對FNSC細胞凋亡的影響,Western blotting法檢測凋亡執(zhí)行蛋白cleaved caspase-3以及凋亡相關蛋白bcl-2和bax的水平,進一步明確七氟烷誘導FNSC細胞凋亡的機制。3.由于FNSC具有增殖和自我分化的特性,采用Ed U插入實驗檢測C組、SL組、SM組以及SH組暴露6h對FNSC增殖的影響;另一批FNSC于藥物處理結束后繼續(xù)培養(yǎng)24h,采用Sox2免疫熒光染色檢測七氟烷對FNSC分化的影響。4.利用Western blotting法檢測SH組處理不同時間(6h,12h,24h)后FNSC中p-JNK以及JNK蛋白表達變化,推測七氟烷對FNSC的活性、增殖、分化影響的可能機制。結果1.與C組相比,SL組處理不同時間(6h,12h,24h)后FNSC細胞活性無明顯影響(P0.05);SM組24h可誘導FNSC活細胞數(shù)降低,有顯著性差異(P0.0001);SH組暴露6h、12h以及24h均可誘導FNSC活細胞數(shù)降低,且呈時間依賴性,有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.與C相比,SH組處理12h、24h可誘導凋亡細胞增加,有統(tǒng)計學差異(P0.05),SH各時間組(6h,12h,24h)之間比較均有統(tǒng)計學差異(P0.05);SH24h組與C組比較cleaved caspase-3蛋白表達水平增加,12h及24h組bcl-2/bax水平降低,有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.與C組相比,SL組以及SM組暴露6h對FNSC的增殖和分化無顯著影響(P0.05),而SH組6h可抑制FNSC的增殖,誘導其自發(fā)分化,差異有統(tǒng)計學意義(P0.001)。4.與C組相比,SH組可上調p-JNK蛋白表達水平,而對總的JNK蛋白無明顯影響,p-JNK/JNK比例呈時間依賴性增加,有統(tǒng)計學差異(P0.05)。結論七氟烷高濃度組呈時間依賴性的誘導FNSC凋亡,并抑制其增殖,誘導其自發(fā)分化,而低、中濃度組并無此作用;七氟烷的濃度依賴性僅在細胞活力上有所體現(xiàn);七氟烷對FNSC活性、增殖、分化的影響可能與激活JNK途徑有關。
【關鍵詞】：七氟烷 胚胎神經(jīng)干細胞 細胞凋亡 增殖 分化
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R614
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 1 前言12-15
• 2 實驗材料15-18
• 2.1 實驗細胞15
• 2.2 實驗用抗體15
• 2.3 主要試劑及配制15-17
• 2.4 實驗儀器17-18
• 3 實驗方法18-26
• 3.1 細胞培養(yǎng)18-19
• 3.2 藥物處理19
• 3.3 MTT比色法19-20
• 3.4 流式FITC-Annexin V/PI法20-21
• 3.5 蛋白印跡法（Western blotting）21-24
• 3.6 Ed U插入實驗24-25
• 3.7 免疫熒光染色25
• 3.8 統(tǒng)計分析25-26
• 4 實驗結果26-31
• 4.1 大鼠胚胎神經(jīng)干細胞免疫熒光檢測鑒定26-27
• 4.2 七氟烷對胚胎神經(jīng)干細胞活性影響的測定27
• 4.3 七氟烷誘導胚胎神經(jīng)干細胞凋亡27-29
• 4.4 七氟烷對FNSC增殖的影響29-30
• 4.5 七氟烷對FNSC分化的影響30-31
• 4.6 七氟烷對JNK途徑的影響31
• 5 討論31-35
• 6 結論35-36
• 7 參考文獻36-41
• 附錄41-42
• 本人簡歷41
• 在校期間的研究成果目錄41-42
• 致謝42-43
• 綜述43-51
• 參考文獻48-51

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊小霖;Edmond Eger;Manohar Sharma;;七氟烷在小鼠中的代謝研究[J];四川醫(yī)學;2012年11期

2 李麗;呂國義;鄧^，

本文編號：335884