軟骨細(xì)胞的主要功能是維持軟骨組織中基質(zhì)代謝的平衡,而基質(zhì)代謝平衡長期被破壞會造成軟骨組織的損傷,進(jìn)而引發(fā)骨關(guān)節(jié)炎等一系列關(guān)節(jié)疾病。影響軟骨細(xì)胞基質(zhì)代謝的因素有很多,如尼古丁、雌激素等,這些因素對細(xì)胞代謝的影響目前尚有爭議,并鮮有報(bào)道關(guān)注多因素間的交叉作用。因此,本研究主旨探討尼古丁和雌激素單獨(dú)或聯(lián)合作用對軟骨細(xì)胞的胞外基質(zhì)代謝的影響及其分子機(jī)制。研究中以鐵硒傳遞蛋白（ITS）誘導(dǎo)成熟之后的軟骨前體ATDC5細(xì)胞作為研究對象,采用細(xì)胞染色、免疫組化、Western blot和Real-time PCR等分子生物學(xué)的方法對處理后的軟骨細(xì)胞基質(zhì)及代謝過程中重要因子進(jìn)行了檢驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)0.06mM尼古丁的直接處理會對軟骨細(xì)胞胞外基質(zhì)的分泌有抑制作用,并且會促進(jìn)基質(zhì)降解酶MMP13表達(dá),從而抑制基質(zhì)合成相關(guān)蛋白BMP-7合成。而生理濃度的1nM雌激素對細(xì)胞的影響與之相反。并且在兩種處理因素同時(shí)存在的情況下,雌激素還能夠減輕尼古丁對細(xì)胞的損傷。另外,為了更好地模擬骨關(guān)節(jié)炎早期軟骨細(xì)胞的炎癥狀態(tài),我們使用尼古丁誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的炎性上清來誘發(fā)軟骨細(xì)胞的炎癥反應(yīng),并且進(jìn)一步研究了雌激素和TNF-α,I... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

鐵硒傳遞蛋白誘導(dǎo)前后ATDC5細(xì)胞胞外基質(zhì)及相關(guān)蛋白檢測結(jié)果圖

上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文-21-結(jié)果在圖2-2中展示，從結(jié)果中能夠看出，從均值來看，僅僅加入雌激素或者僅僅加入尼古丁細(xì)胞的活性會有一定的升高，而在兩種藥物都存在的情況下，乳酸脫氫酶均值會有所降低，這說明藥物處理對活性有一定影響。但是，由于重復(fù)的組別數(shù)據(jù)有所差異，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析之后，發(fā)現(xiàn)四組的吸光度在統(tǒng)計(jì)學(xué)上沒有顯著差異。所以，我們不能夠下結(jié)論說細(xì)胞的活性會受到藥物處理的影響。綜合結(jié)果來看，藥物處理對細(xì)胞活性有一定影響但是對其影響不具備顯著性。圖2-2.乳酸脫氫酶對四組藥物處理細(xì)胞活性檢驗(yàn)結(jié)果結(jié)果為使用乳酸脫氫酶標(biāo)準(zhǔn)試劑盒得到，使用分光光度法測量四組細(xì)胞的乳酸脫氫酶含量統(tǒng)計(jì)學(xué)上沒有顯著性的差異。（*:P<0.05,n=3）Figure2-2.ResultsofLDHassaysoffourgroupsofdrugstreatedchondrocytes.TheresultswereobtainedusingaLDHAssaystandardkit,andtherewasnostatisticallysignificantdifferenceofthefourgroupsofcellsmeasuredbyspectrophotometrymethod.(*:P<0.05,,n=3)2.3.3蛋白聚糖水平在藥物處理影響下的變化雌激素及尼古丁的處理能夠影響細(xì)胞胞外蛋白聚糖表達(dá)的變化，在圖2-3的甲苯胺藍(lán)染色結(jié)果中，我們可以看出，與空白對照組相比，雌激素處理組，細(xì)胞胞外的藍(lán)紫色程度更深，而尼古丁處理組藍(lán)紫色程度要淺一些。而在雌激素存在的情況下，依然加入尼古丁的組，細(xì)胞的藍(lán)紫色程度與空白對照組接近。研究中還使用了ImageProPlus的軟件對染色的平均光密度進(jìn)行了檢測。從檢測得到的平均光密度值可以看出，雌激素處理組的值比對照組有顯著升高，而尼古丁處理組的值比對照組有顯著降低，而在雌激素和尼古丁同時(shí)存在的組別，光密度的值比僅僅使用尼古丁處理有顯著的上升，和空白對照組的光密度值接近。綜合上述

上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文-22-結(jié)果能夠看出，雌激素本身對細(xì)胞蛋白聚糖的分泌有促進(jìn)的作用，而尼古丁會降低蛋白聚糖的表達(dá)，對基質(zhì)分泌有一定破壞作用。另外，雌激素能夠減少尼古丁對蛋白聚糖分泌的影響，使得細(xì)胞蛋白聚糖依然能夠維持在正常水平。圖2-3.四組藥物處理細(xì)胞胞外蛋白聚糖甲苯胺藍(lán)染色結(jié)果實(shí)驗(yàn)對甲苯胺藍(lán)染色結(jié)束之后的細(xì)胞進(jìn)行了倒置顯微鏡觀察并且拍攝了顯微照片。顯微照片中甲苯胺藍(lán)染色程度使用軟件ImageProPlus6.0對整張圖片部分進(jìn)行了光密度分析。（*：P<0.05，n=3）Figure2-3.Resultsofextracellularaggrecantoluidinebluestaininginfourgroupsofdrug-treatedcells.Thecellsaftertoluidinebluestainingwereobservedusinganinvertedmicroscopeandmicrographsweretaken.ThedegreeoftoluidinebluestaininginthephotographswasdetectedusingthesoftwareImageProPlus6.0amongtheentireimageportion.(*:P<0.05,n=3)2.3.4二型膠原水平在藥物處理下的變化雌激素及尼古丁的處理還能夠影響細(xì)胞基質(zhì)二型膠原表達(dá)的變化，在圖2-4

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雌激素及相關(guān)化合物干預(yù)骨關(guān)節(jié)炎作用機(jī)制:關(guān)節(jié)保護(hù)與骨軟骨細(xì)胞的修復(fù)[J]. 王健,陶海榮.  中國組織工程研究. 2014(33)
[2]粘彈性物補(bǔ)充療法的研究進(jìn)展[J]. 顧其勝,周寧輝.  中國修復(fù)重建外科雜志. 2011(06)
[3]雌激素與女性骨關(guān)節(jié)炎[J]. 宋亦軍,林守清.  國外醫(yī)學(xué).婦產(chǎn)科學(xué)分冊. 2005(05)

碩士論文
[1]尼古丁在巨噬細(xì)胞介導(dǎo)下對血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子表達(dá)的作用[D]. 王亞靜.山西醫(yī)科大學(xué) 2003



本文編號：3325520