關(guān)節(jié)軟骨主要由軟骨細(xì)胞以及其分泌的細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)成。在正常的關(guān)節(jié)軟骨組織內(nèi)基本無血管或淋巴管等,因此受損后難以自行修復(fù)。肌腱連接骨與肌肉的部位稱為腱骨連接,其結(jié)構(gòu)分別由肌腱、纖維軟骨、骨構(gòu)成。這其中,纖維軟骨在力學(xué)方面具有重要作用,一旦出現(xiàn)損傷,機(jī)體多以瘢痕愈合進(jìn)行修復(fù),其強(qiáng)度較差,易發(fā)生二次損傷。在關(guān)節(jié)軟骨損傷或腱骨連接損傷發(fā)生后,機(jī)體會(huì)產(chǎn)生較強(qiáng)炎癥反應(yīng),刺激基質(zhì)金屬蛋白酶等軟骨細(xì)胞外基質(zhì)降解酶的合成,打破外基質(zhì)代謝平衡,軟骨組織難以修復(fù)。目前常規(guī)治療手段針對(duì)關(guān)節(jié)軟骨缺損修復(fù)以及腱骨愈合均難以取得良好的修復(fù)效果。為此,我們構(gòu)建了一種具有抗炎作用及軟骨保護(hù)作用的可注射載藥水凝膠。一方面,作為載藥系統(tǒng)的生物活性玻璃水凝膠,具有一定的抗炎作用及軟骨保護(hù)作用,另一方面,通過搭載同樣具有抗炎作用及軟骨保護(hù)作用的槲皮素來增強(qiáng)水凝膠相關(guān)能力。體外實(shí)驗(yàn)證實(shí),該復(fù)合水凝膠具有維持軟骨細(xì)胞表型的能力,使得軟骨細(xì)胞持續(xù)分泌二型膠原蛋白等軟骨細(xì)胞外基質(zhì)主要成分;該復(fù)合水凝膠具有抗炎能力,可以促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M2型極化、下調(diào)退變軟骨細(xì)胞中外基質(zhì)降解酶的表達(dá)。此外,該水凝膠具有可注射性,使用方便。在復(fù)合水凝膠材料植... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

大鼠軟骨細(xì)胞的甲苯胺藍(lán)染色（標(biāo)尺：100μm）

上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文11甲苯胺藍(lán)染色使細(xì)胞內(nèi)蛋白多糖呈藍(lán)紫色，可鑒定細(xì)胞是否具有分泌合成軟骨細(xì)胞外基質(zhì)的功能。如圖2-1所示，在顯微鏡下可以觀察到，細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿呈現(xiàn)藍(lán)色，細(xì)胞核染色深于細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色呈陽(yáng)性。證實(shí)所提取細(xì)胞為大鼠軟骨細(xì)胞。2.4.3II型膠原免疫熒光染色如圖2-2所示，在熒光顯微鏡下，細(xì)胞中細(xì)胞膜和胞質(zhì)呈黃綠色熒光，細(xì)胞核呈藍(lán)色。綠色熒光顯示了細(xì)胞呈現(xiàn)出軟骨細(xì)胞外基質(zhì)標(biāo)記物Ⅱ型膠原的表達(dá)。證實(shí)細(xì)胞為大鼠軟骨細(xì)胞。圖2-2大鼠軟骨細(xì)胞的II型膠原免疫熒光染色（標(biāo)尺：50μm）Fig.2-2CollagenIIimmunofluorescencestainingofratchondrocytes（Scalebar：50μm）2.5小結(jié)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞、肋軟骨細(xì)胞均屬于透明軟骨細(xì)胞，其主要特點(diǎn)是中含有較多的II型膠原和糖胺聚糖。在3周齡大鼠中，其股骨頭未出現(xiàn)骨化，為透明軟骨。本實(shí)驗(yàn)選擇取用此處關(guān)節(jié)軟骨與膝關(guān)節(jié)部分軟骨作為細(xì)胞來源，用雙酶消化法提取原代大鼠軟骨細(xì)胞。既往文獻(xiàn)中多采用上述方法獲得原代軟骨細(xì)胞，但在胰酶的消化時(shí)間及II型膠原酶的消化時(shí)間上略有不同。多次提取原代軟骨細(xì)胞后，我們發(fā)現(xiàn)，在II型膠

蘧?%海藻酸鈉溶液以及液體狀態(tài)下的2%瓊脂糖溶液后,用電子分析天平稱取3.0mg的槲皮素，加入到一個(gè)5mL的注射器中，注射器內(nèi)吸取2.5mL的瓊脂糖溶液，充分混勻，在一個(gè)注射器內(nèi)吸取2.5mL的海藻酸鈉溶液，將2個(gè)注射器連接在三通管的兩端，使得注射器之間聯(lián)通，排盡注射器內(nèi)的空氣后交替擠壓注射器將瓊脂糖溶液和海藻酸鈉溶液通過三通管混合，交替擠壓使得兩溶液均勻混合。隨著混合溶液溫度的降低，瓊脂糖會(huì)開始緩慢凝膠，從而得到可注射的海藻酸鈉/瓊脂糖水凝膠。按照上述比例配制的可注射水凝膠，在室溫下凝膠溫度約為37℃。圖3-1Que-BG水凝膠材料的形貌特征Fig.3-1MorphologicalcharacteristicsofQue-BGhydrogel

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]應(yīng)用大鼠血清建立體外軟骨細(xì)胞退變模型[J]. 王小軍,張浩,詹紅生,丁道芳.  浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2015 (03)



本文編號(hào)：3323409