目的:骨關節(jié)炎（Osteoarthritis,OA）是肌肉骨骼系統(tǒng)中最常見的炎癥性、退行性疾病之一,可導致患者明顯的關節(jié)功能障礙和生活質(zhì)量下降。預計OA在2020年將成為第四大致殘性疾病,給患者造成嚴重的生活負擔,并對家庭及社會造成巨大的經(jīng)濟負擔。盡管近年來已有大量針對OA的研究,但因其病理機制復雜,目前治療OA的臨床策略任然非常有限。除了物理治療,定期鍛煉和減肥,藥物干預也僅限于緩解癥狀。在終末期OA,人工關節(jié)置換術似乎是唯一可選擇的能有效改善關節(jié)功能、提高生活質(zhì)量的治療方式。因此,只有進一步了解OA發(fā)病的分子機制,才能為尋找新的特異性治療靶點和治療策略提供理論依據(jù)。Kruppel樣轉(zhuǎn)錄因子2（Kruppel-like factor 2,KLF2）是鋅指類Kruppel樣轉(zhuǎn)錄因子家族（Kruppel-like factors,KLFs）的一員,因其在調(diào)控免疫細胞功能、細胞增殖、分化中的重要作用而被廣泛研究。既往研究顯示KLF2與一系列炎癥性疾病存在密切聯(lián)系,然而關于KLF2是否與OA存在相關性以及KLF2在OA中的作用尚未被詳細闡述。氧化應激被認為在OA病理發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。有... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

軟骨樣本示例圖

中國醫(yī)科大學博士學位論文6骨無任何損傷或退變征象的區(qū)域�；颊咭话阗Y料見附表1。2.2.2.2光滑軟骨與損傷軟骨樣本的收集第二部分實驗軟骨樣本包含由損傷軟骨樣本和光滑軟骨樣本組成的10對標本，每一對均來自同一例在我院行TKA的OA患者。光滑軟骨樣本（關節(jié)面無損傷區(qū)域）和損傷軟骨樣本（關節(jié)面嚴重受損區(qū)域）是基于Mankin評分系統(tǒng)來區(qū)分的[25]（圖1.2）。本部分OA患者納入標準：I符合美國風濕病學會關于膝骨關節(jié)炎的診斷標準，擬在我院行TKA患者；II術前影像學及術中觀察均顯示患者為明顯單側(cè)間室OA病變；III患者同意捐獻標本。OA患者的排除標準：I既往痛風、風濕性關節(jié)炎或系統(tǒng)性紅斑狼瘡病史；II既往膝關節(jié)感染史或外傷史；III既往皮質(zhì)類固醇藥物治療史或慢性炎癥性疾病史。患者一般資料見附表2。圖1.2OA患者光滑軟骨樣本與損傷軟骨樣本術中示例圖。2.2.2.3OA軟骨樣本的收集第三部分實驗軟骨樣本包含54例OA軟骨。軟骨樣本均采集自在我院行TKA的OA患者。OA患者的納入標準：I符合美國風濕病學會關于膝骨關節(jié)炎的診斷標準，擬在我院行TKA患者；II患者同意捐獻標本。OA患者的排除標準：I既往痛風、風濕性關節(jié)炎或系統(tǒng)性紅斑狼瘡病史；II既往膝關節(jié)感染史或外傷史；III既往皮質(zhì)類固醇藥物治療史或慢性炎癥性疾病史。膝關節(jié)取材部位為股骨內(nèi)、外側(cè)髁負重區(qū)域�；颊咭话阗Y料見附表3。2.2.3軟骨組織總RNA的提�。�1）準備工作：將抽提總RNA過程中所要用的器械和耗材放置于0.1%的焦碳酸二乙酯（DEPC）水中浸泡12個小時；高壓滅菌、去除殘留的DEPC水，放入烘箱中充分烘干；

中國醫(yī)科大學博士學位論文12和免疫組織化學法分別檢測兩組樣本中KLF2，MMP13及COL2A1的mRNA和蛋白表達水平。首先通過番紅O染色鑒定兩組軟骨樣本間的組織學變化。染色實驗結(jié)果顯示，正常組的軟骨組織有較多的番紅O著色，而OA軟骨樣本番紅O著色明顯少于正常組（圖1.4A）。這表示OA組的軟骨樣本存在明顯的軟骨退變情況，是OA的典型病理學改變。Rt-qPCR和免疫組織化學實驗結(jié)果顯示，與正常軟骨組織相比，OA軟骨組織中KLF2的mRNA和蛋白表達水平顯著降低，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）（圖1.4B、C）。這一結(jié)果與上一部分的芯片分析結(jié)果一致。作為OA發(fā)生發(fā)展中的標志性蛋白，我們進一步通過Rt-qPCR和免疫組織化學法檢測了兩組樣本中MMP-13和COL2A1的表達情況。與預期的一樣，MMP-13在OA軟骨組織中的mRNA和蛋白表達水平顯著升高，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。而COL2A1在OA軟骨組織中的mRNA和蛋白表達水平顯著降低，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）（圖1.4B、D）。圖1.4KLF2的表達水平在OA軟骨組織中顯著下降。A番紅O/固綠染色對軟骨組織樣本進行組織學評價。BRt-qPCR檢測軟骨組織樣本中KLF2、MMP-13和COL2A1的mRNA表達水平。C免疫組織化學染色檢測軟骨組織樣本中KLF2的蛋白表達水平，右側(cè)柱狀圖為Image-ProPlus定量結(jié)果。D免疫組織化學染色檢測軟骨組織樣本中OAmarker蛋白MMP-13和COL2A1的蛋白表達水平，右側(cè)柱狀圖為Image-ProPlus定量結(jié)果。數(shù)據(jù)結(jié)果均以均數(shù)±標準差的形式表示，Scalebar=200μm，*P＜0.005，**P＜0.0005。Normal：正常軟骨樣本組，OA：OA軟骨樣本組。

【參考文獻】：
博士論文
[1]MicroRNA-449a調(diào)控在骨關節(jié)炎中的生物學作用及機制研究[D]. 吳建軍.武漢大學 2018



本文編號：3290891