背景：骨肉瘤（osteosarcoma）是最常見的骨的原發(fā)惡性腫瘤,新輔助化療加手術(shù)切除是目前治療骨肉瘤的通用方法。但有一定比例的患者存在先天或繼發(fā)的對(duì)化療藥物的耐藥,其生存率明顯低于非化療耐藥的患者。Hioop信號(hào)通路是由一系列蛋白激酶和轉(zhuǎn)錄共激活因子所組成,負(fù)責(zé)調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化和凋亡等功能�，F(xiàn)在的研究發(fā)現(xiàn)Hioop信號(hào)通路的失調(diào)不僅與多種腫瘤的發(fā)生相關(guān),并且在腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生對(duì)化療的耐藥性方面也扮演了重要角色。我們此次主要研究骨肉瘤細(xì)胞株MG63細(xì)胞中Hippo/TAZ信號(hào)通路在接受化療藥物處理后的變化情況,希望能夠發(fā)現(xiàn)Hippo/TAZ信號(hào)通路在骨肉瘤細(xì)胞耐藥性方面的作用及功能。方法：我們建立了穩(wěn)定敲低TAZ的骨肉瘤細(xì)胞株MG63,用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,并用流式細(xì)胞儀檢測(cè)了其凋亡情況。我們用蛋白免疫印跡技術(shù)檢測(cè)骨肉瘤細(xì)胞株MG63在接受化療藥物甲氨蝶呤和阿霉素處理后,細(xì)胞內(nèi)TAZ蛋白水平的變化。用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)骨肉瘤細(xì)胞株MG63在接受化療藥物甲氨蝶呤和阿霉素處理后,細(xì)胞內(nèi)TAZ及下游基因CTGF、Cyr61的mRNA水平的變化。結(jié)果：敲低TAZ能夠抑制骨肉瘤細(xì)胞增... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：53 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１哺孔動(dòng)物的Ｈｉｐｐｏ通路示意圖??經(jīng)典Ｈｉｐｐｏ信號(hào)通路；ＭＳＴｌ／２和ＬＡＴＳｌ／２通過與ＳＡＶＩ和ＭＯＢｌ的?

為了研巧Ｈｉｐｐｏ通巧中ＴＡＺ蛋白在骨肉瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性方面的??作用，我們建立了穩(wěn)定巧低ＴＡＺ的ＭＧ６３細(xì)胞株，其內(nèi)ＴＡＺ的蛋白含量與對(duì)照組??相比明顯降低（圖２?Ａ）。??與對(duì)照相比，ＴＡＺ巧低的ＭＧ６３細(xì)胞生長(zhǎng)曲線右移，說(shuō)明細(xì)胞増殖速度受到??抑制（圖２?Ｂ）。圖２?Ｃ顯示ＴＡＺ巧低的ＭＧ６３細(xì)胞在化療藥物甲氮碟吟（２０．０?ｍＭ）??和阿霉素（１．０片Ｍ）處理后，其調(diào)亡細(xì)胞所占百分比要明顯高于對(duì)照細(xì)胞（＂＝３，戶＜??０．０５），提示甲安：煤吟和阿巧素治療時(shí)，ＴＡＺ穩(wěn)定敲低的ＭＧ６３細(xì)胞的調(diào)亡増加，??其對(duì)化療藥物更敏感。??１５??

為了進(jìn)一步研巧，我們采用甲気蝶吟不同的濃度（１０?ｍＭ和２０?ｍＭ）處理２４??ｈ，發(fā)現(xiàn)ＭＧ６３細(xì)胞內(nèi)的ＴＡＺ蛋白水平顯著下調(diào)，且隨著濃度増?bào){ＴＡＺ蛋白下降??更甚（圖３Ａ）；阿霉素濃度（０．２５ＵＭ和化５?口Ｍ）處理ＭＧ６３細(xì)胞２４ｈ，細(xì)胞內(nèi)??的ＴＡＺ蛋白同樣降低明顯（圖３Ｃ）；??進(jìn)一步，我們采用甲氨蝶吟２０?ｍＭ不同時(shí)間（１２?ｈ和２４?ｈ）處理ＭＧ６３細(xì)胞，??發(fā)現(xiàn)１２ｈ時(shí)，細(xì)胞內(nèi)ＴＡＺ蛋白含量己降低，至２４ｈ時(shí)，ＴＡＺ蛋白降低程度更大??（圖３?Ｂ）。另分別于１２?ｈ和２４?ｈ用阿霉素化５?ＩＸＭ處理ＭＧ６３細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)與甲氨??蝶吟類似結(jié)果（圖３Ｄ）。??．由此提示，ＭＧ６３細(xì)胞經(jīng)過化療藥物甲氨蝶吟和阿霉素處理后，其內(nèi)的ＴＡＺ??蛋白表達(dá)下調(diào)的程度，隨藥物濃度増加和時(shí)間延長(zhǎng)而増加。??Ｉ??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Hippo signaling:A hub of growth control,tumor suppression and pluripotency maintenance[J]. Mengxin Yin,Lei Zhang~* State Key Laboratory of Cell Biology,Institute of Biochemistry and Cell Biology,Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences,320 Yueyang Road,Shanghai 200031,China.  遺傳學(xué)報(bào). 2011(10)



本文編號(hào)：3266498