發(fā)布時間：2021-05-15 07:18

　　目的由各種原因?qū)е碌墓侨睋p問題是目前臨床上的一個難題,但現(xiàn)有的解決方法弊端很多。神經(jīng)肽Y可以促進干細胞向成骨細胞分化,本實驗通過神經(jīng)肽Y與人臍帶間充質(zhì)干細胞的作用來明確神經(jīng)肽Y對人臍帶間充質(zhì)干細胞成骨分化的影響,并嘗試構(gòu)建新型的骨組織工程修復(fù)材料。方法本實驗分為兩部分,體內(nèi)實驗和體外實驗。在體外實驗中,以人臍帶間充質(zhì)干細胞為實驗細胞,神經(jīng)肽Y作為成骨誘導(dǎo)因子,在培養(yǎng)過程中通過分組觀察堿性磷酸酶對成骨細胞的染色、茜素紅對鈣結(jié)節(jié)的染色、PCR技術(shù)對成骨相關(guān)基因的檢測分析以及Western Blot技術(shù)對成骨相關(guān)蛋白的檢測來觀察神經(jīng)肽Y是否可以促進人臍帶間充質(zhì)干細胞向成骨細胞分化。在體內(nèi)實驗中,制備神經(jīng)肽Y/I型膠原/β-TCP復(fù)合體,再選用SD大鼠為實驗動物構(gòu)建大鼠顱骨缺損模型,將制備成功的神經(jīng)肽Y/I型膠原/β-TCP復(fù)合體通過外科手術(shù)的方式植入到大鼠顱骨缺損模型中。SPF動物房繼續(xù)飼養(yǎng),并于第30天用頸椎脫臼法處死大鼠,獲取完整的顱骨標(biāo)本。將標(biāo)本進行Micro-CT掃描,觀察神經(jīng)肽Y/I型膠原/β-TCP復(fù)合體對大鼠顱骨缺損的修復(fù)作用。結(jié)果通過堿性磷酸酶染色、茜素紅染色、PCR及Wes... 

【文章來源】：深圳大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
緒言
第一章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 實驗細胞系
        2.1.2 實驗藥物及試劑
        2.1.3 實驗動物
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
        2.1.5 主要培基及藥物配制
    2.2 方法
        2.2.1 體外實驗方法
            2.2.1.1 人臍帶血間充質(zhì)干細胞復(fù)蘇與培養(yǎng)
            2.2.1.2 誘導(dǎo)干細胞向成骨細胞分化
            2.2.1.3 堿性磷酸酶染色
            2.2.1.4 茜素紅染色
            2.2.1.5 qRT-PCR定量實驗
            2.2.1.6 Western-blot檢測蛋白的表達
        2.2.2 體內(nèi)實驗方法
            2.2.2.1 物品準(zhǔn)備及術(shù)前大鼠處理
            2.2.2.2 大鼠稱重、麻醉
            2.2.2.3 大鼠手術(shù)及術(shù)后管理方法
            2.2.2.4 大鼠處死獲取標(biāo)本及標(biāo)本檢測
        2.2.3 實驗數(shù)據(jù)分析
第二章 實驗結(jié)果
    3.1 體外實驗
        3.1.1 神經(jīng)肽Y可以提高人臍帶間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)為成骨細胞的效率
        3.1.2 神經(jīng)肽Y可以促進成骨細胞鈣結(jié)節(jié)的形成
        3.1.3 神經(jīng)肽Y可以增加ALP,OCN,Runx2 以及β -catenin的mRNA表達
        3.1.4 神經(jīng)肽Y對成骨細胞相關(guān)蛋白表達量的影響
    3.2 體內(nèi)實驗
        3.2.1 神經(jīng)肽Y/I型膠原/β -TCP凝膠的制備
        3.2.2 大鼠頭骨缺損模型的構(gòu)建
        3.2.3 神經(jīng)肽Y/I型膠原/β -TCP復(fù)合體整合至骨損傷處
        3.2.4 NPY可以明顯的促進大鼠顱骨損傷模型的修復(fù)
第三章 討論
結(jié)論
參考文獻
英文縮略詞簡表
神經(jīng)營養(yǎng)因子在骨組織形成及骨組織損傷修復(fù)中的作用(綜述)
    參考文獻
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間的研究成果



本文編號：3187209