目的:創(chuàng)面愈合是由多種細(xì)胞和分子參與的高度協(xié)調(diào)的生理過程。然而,當(dāng)這一過程中參與的細(xì)胞或分子調(diào)節(jié)出現(xiàn)錯誤,就會導(dǎo)致創(chuàng)面難愈和瘢痕病理性累積的發(fā)生。人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞（Human Amniotic Mesenchymal Stem Cells,hAMSCs）通過旁分泌的方式在皮膚創(chuàng)面修復(fù)、組織再生中發(fā)揮重要作用。其中,外泌體是關(guān)鍵的旁分泌介質(zhì),它通過轉(zhuǎn)移miRNAs等生物活性分子來誘導(dǎo)再生效應(yīng)。本研究旨在探討來源于hAMSCs的外泌體（hAMSC-Exos）對創(chuàng)面愈合的影響及其作用機制。研究方法:1、分離羊膜組織中的hAMSCs并用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行鑒定。2、超離法提取hAMSC-Exos并鑒定。3、體內(nèi)試驗將C57小鼠背部全層皮膚切除并記錄創(chuàng)面愈合速度及瘢痕面積大小。4、取愈合后28天C57小鼠表皮組織包埋并進(jìn)行組織學(xué)觀察。5、將hAMSC-Exos用PKH-26標(biāo)記,熒光顯微鏡下觀察能否被靶細(xì)胞攝取。6、hAMSC-Exos對HaCaT、Fbs細(xì)胞增殖、遷移的影響。7、hAMSC-Exos中促進(jìn)創(chuàng)面修復(fù)的相關(guān)miRNAs的篩選及Real-time PCR驗證。結(jié)果:1、成功分離提取hAM... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
1 前言
2 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 動物和細(xì)胞
        2.1.2 試劑
        2.1.3 儀器和材料
    2.2 實驗方法
        2.2.1 hAMSCs細(xì)胞的分離、培養(yǎng)
        2.2.2 流式細(xì)胞鑒定hAMSCs表面標(biāo)記物
        2.2.3 hAMSC-Exos的分離提取
        2.2.4 Western Blot檢測hAMSC-Exos表面標(biāo)記CD9、CD63、CD81
        2.2.5 流式細(xì)胞儀鑒定hAMSC-Exos表面標(biāo)記物
        2.2.6 納米顆粒跟蹤分析技術(shù)（NTA）鑒定hAMSC-Exos
        2.2.7 電鏡鑒定hAMSC-Exos
        2.2.8 創(chuàng)建小鼠C57皮膚創(chuàng)面模型
        2.2.9 冰凍切片的制備
        2.2.10 HE染色
        2.2.11 Masson染色
        2.2.12 PKH-26 標(biāo)記的hAMSC-Exos的攝取實驗
        2.2.13 CCK-8檢測細(xì)胞增殖
        2.2.14 Transwell實驗檢測細(xì)胞遷移
        2.2.15 劃痕實驗檢測FBs細(xì)胞遷移
        2.2.16 hAMSC-Exos中 miRNA和 FBs中 RNA的提取
        2.2.17 FBs中創(chuàng)面修復(fù)有關(guān)基因的mRNA的逆轉(zhuǎn)錄
        2.2.18 hAMSC-Exos中 miRNAs的逆轉(zhuǎn)錄
        2.2.19 Real time PCR反應(yīng)
        2.2.20 統(tǒng)計學(xué)分析
3 實驗結(jié)果
    3.1 hAMSCs細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定
    3.2 hAMSC-Exos的分離和鑒定
        3.2.1 Western Blot檢測hAMSC-Exos表面標(biāo)記蛋白
        3.2.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測hAMSC-Exos表面標(biāo)記物
        3.2.3 NTA檢測hAMSC-Exos粒徑大小
        3.2.4 透射電鏡鑒定hAMSC-Exos
    3.3 hAMSC-Exos促進(jìn)C57小鼠創(chuàng)面愈合速度
    3.4 hAMSC-Exos抑制C57小鼠瘢痕形成
    3.5 HE染色顯示創(chuàng)面愈合情況
    3.6 Masson染色觀察膠原排列情況
    3.7 PKH-26 標(biāo)記的hAMSC-Exos的攝取實驗
    3.8 hAMSC-Exos對 FBs細(xì)胞增殖能力無影響
    3.9 Transwell實驗顯示hAMSC-Exos促進(jìn)HaCaT和 FBs細(xì)胞遷移
        3.9.1 Transwell實驗檢測hAMSC-Exos促進(jìn)HaCaT細(xì)胞遷移
        3.9.2 Transwell實驗顯示hAMSC-Exos促進(jìn)FBs細(xì)胞遷移
    3.10 劃痕實驗顯示hAMSC-Exos促進(jìn)FBs細(xì)胞遷移
    3.11 Real time PCR檢測FBs內(nèi)創(chuàng)面修復(fù)相關(guān)基因的含量變化
    3.12 hAMSC-Exos中 miRNAs的篩選與驗證
4 討論
5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
博士論文
[1]hAMSCs來源外泌體通過遞送miRNAs促進(jìn)皮膚創(chuàng)面修復(fù)的機制研究[D]. 李瑩.中國醫(yī)科大學(xué) 2019



本文編號：3153364