發(fā)布時間：2021-04-08 17:38

　　隨著我國老齡化社會的加劇,臨床上骨缺損的修復(fù)將面臨極大的挑戰(zhàn)。目前大段骨缺損主要以自體骨修復(fù)作為“金標(biāo)準(zhǔn)”,但自體骨來源有限,限制了其發(fā)展;異體骨、異種骨會產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng),引起炎癥,加大感染等風(fēng)險。近年來,組織工程的研究與發(fā)展為大段骨缺損提供了一個新的途徑——進(jìn)行人工器官移植,其原理是將種子細(xì)胞和材料支架在體外構(gòu)建出與機(jī)體組織結(jié)構(gòu)及功能相似的人工組織或器官,植入病損部位來實現(xiàn)修復(fù)病損部位的組織或器官。由于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）具有來源穩(wěn)定、取材方便、在一定的誘導(dǎo)條件下可向多種類型的細(xì)胞分化的優(yōu)點,可作為組織工程骨的理想種子細(xì)胞。但是如何體外快速、有效的擴(kuò)增足夠數(shù)量的BMSCs是組織工程骨應(yīng)用于臨床需要解決的問題之一。組織工程骨支架材料需要具有良好的生物相容性、可加工性、可降解性、降解產(chǎn)物對機(jī)體無毒副作用以及具有合適的力學(xué)性能。羥基磷灰石（HA）材料具有良好的生物相容性與骨傳導(dǎo)性。聚己內(nèi)酯（PCL）材料具有良好的延展性能和可降解性,將兩者結(jié)合制備HA/PCL復(fù)合材料作為組織工程骨支架材料有著廣泛的應(yīng)用前景。但是將種子細(xì)胞接種于支架材料中如何保持BMSCs的活性從而形成骨組織仍然... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略語表
中文摘要
英文摘要
前言
文獻(xiàn)回顧
    文獻(xiàn)回顧一 組織工程骨的研究進(jìn)展
        1 種子細(xì)胞
            1.1 干細(xì)胞的分類
            1.2 BMSCs
            1.3 成骨細(xì)胞
        2 組織工程骨生物支架
            2.1 組織工程骨對支架的要求
            2.2 組織工程骨支架種類
            2.3 組織工程骨支架的制備方法
        3 組織工程骨組織構(gòu)建
    文獻(xiàn)回顧二 低頻脈沖電磁場對骨組織的影響
        1 PEMF
        2 PEMF對骨組織的影響
        3 PEMF對骨細(xì)胞的影響
            3.1 PEMF對成骨細(xì)胞及破骨細(xì)胞的影響
            3.2 PEMF對BMSCs的影響
實驗一 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)
    1 材料
        1.1 實驗動物
        1.2 主要儀器
        1.3 主要試劑
    2 方法
        2.1 BMSCs的分離及原代培養(yǎng)
        2.2 BMSCs的傳代培養(yǎng)
        2.3 BMSCs的細(xì)胞計數(shù)
        2.4 BMSCs流式細(xì)胞儀鑒定
        2.5 BMSCs多項分化能力鑒定
    3 結(jié)果
        3.1 BMSCs原代培養(yǎng)
        3.2 BMSCs流式細(xì)胞儀鑒定
        3.3 BMSCs成骨誘導(dǎo)鑒定
        3.4 BMSCs成脂誘導(dǎo)鑒定
    4 討論
實驗二 具有骨誘導(dǎo)能力的HA/PCL組織工程骨支架的制備及表征
    1 材料
    2 方法
        2.1 HA/PCL復(fù)合支架材料的制備
        2.2 HA/PCL復(fù)合支架材料的樣品表征
        2.3 體外細(xì)胞相容性表征
    3 結(jié)果
        3.1 體式顯微鏡觀察
        3.2 掃描電子顯微鏡觀察
        3.3 細(xì)胞相容性
    4 討論
實驗三 PEMF對BMSCs的增殖與分化的影響
    1 材料
    2 方法
        2.1 BMSCs細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 PEMF電磁刺激儀
        2.3 MTT檢測
        2.4 ALP活性檢測
        2.5 統(tǒng)計學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 PEMF對BMSCs增殖的影響
        3.2 PEMF對BMSCs ALP活性的影響
    4 討論
實驗四 PEMF對組織工程骨的體外研究
    1 材料
        1.1 實驗動物
        1.2 主要儀器與試劑
    2 方法
        2.1 BMSCs的原代培養(yǎng)
        2.2 HA/PCL組織工程骨支架的構(gòu)建
        2.3 PEMF電磁刺激儀
        2.4 PEMF對HA/PCL組織工程骨支架中BMSCs活性的影響
        2.5 PEMF對HA/PCL組織工程骨支架中BMSCs細(xì)胞骨架的影響
        2.6 PEMF對HA/PCL組織工程骨支架中BMSCs ALP活性的影響
        2.7 PEMF對HA/PCL組織工程骨支架中BMSCs礦化的影響
        2.8 RT-PCR檢測
        2.9 統(tǒng)計學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 PEMF對HA/PCL組織工程骨支架中BMSCs活性與增殖的影響
        3.2 PEMF 對 HA/PCL 組織工程骨支架中 BMSCs 細(xì)胞骨架影響
        3.3 PEMF對HA/PCL組織工程骨支架中BMSCs細(xì)胞ALP活性的影響
        3.4 PEMF對HA/PCL組織工程骨支架中BMSCs礦化能力的影響
        3.5 PEMF對HA/PCL組織工程骨支架中BMSCs基因表達(dá)的影響
    4 討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
個人簡歷和研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]脈沖電磁場對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖、成骨分化和Wnt/β-catenin信號通路的影響[J]. 周予婧,王樸,陳紅英,劉遄,季僑丹,陽筱甜,高強(qiáng),何成奇.  四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2015(03)
[2]骨組織工程支架研究進(jìn)展[J]. 徐大朋,王緒凱.  中國實用口腔科雜志. 2014(03)
[3]骨組織工程支架材料應(yīng)用于大段骨缺損的實驗研究進(jìn)展[J]. 李東亞,鄭欣,陳一心.  創(chuàng)傷外科雜志. 2013(01)
[4]Proliferation and differentiation into endothelial cells of human bone marrow mesenchymal stem cells （MSCs） on poly DL-lactic-co-glycolic acid （PLGA） films[J]. YUE Huimin1*, ZHANG Lei2*, WANG Yunfang1, LIANG Feng1, GUAN Lidong1, LI Shaoqing1, YAN Fang1, NAN Xue1, BAI Cixian1, LIN Feng2, YAN Yongnian2 & PEI Xuetao1 1. Department of Stem Cell Biology, Institute of Transfusion Medicine, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100850, China; 2. Research Center of Laser Rapid Forming, Mechanical Department of Tsinghua University, Beijing 100084, ChinaThese authors contributed equally to this work..  Chinese Science Bulletin. 2006(11)
[5]低強(qiáng)度脈沖電磁場對兔心血管系統(tǒng)的影響[J]. 羅二平,焦李成,申廣浩,吳小明,路麗華,徐巧玲,劉魯偉.  第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2005(06)
[6]電磁場細(xì)胞生物效應(yīng)研究進(jìn)展[J]. 童珊,黃華,陳槐卿.  國外醫(yī)學(xué).生物醫(yī)學(xué)工程分冊. 2004(05)
[7]脈沖電磁場促進(jìn)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨的研究[J]. 趙敏,許建中,周強(qiáng),王序全,朱灝,秦輝,單建林.  中國矯形外科雜志. 2004(06)
[8]電磁輻射生物效應(yīng)的機(jī)理研究述評[J]. 劉亞寧.  基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2000(01)
[9]談?wù)勆镫姶艑W(xué)研究熱點——非熱效應(yīng)[J]. 陳國璋,陳惠曉.  物理. 1998(03)



本文編號：3125961