背景:目前舊藥的新功能引起越來越多的關(guān)注,特別是用于癌癥治療方面,且治療同時很少能緩解癌癥疼痛。自噬是一種重要的生物降解過程,與癌癥的發(fā)病機制密切相關(guān)。自噬介導(dǎo)有缺陷的細(xì)胞器、錯誤折疊或聚集的蛋白質(zhì)和某些長壽命分子的再利用,以調(diào)節(jié)細(xì)胞穩(wěn)態(tài)。自噬在癌癥中發(fā)揮雙重作用,既可以抑制細(xì)胞凋亡促進(jìn)既定腫瘤的生長,又可以通過阻止受損蛋白質(zhì)和細(xì)胞器的累積起到腫瘤抑制的作用。腫瘤所處的微環(huán)境營養(yǎng)匱乏。在營養(yǎng)匱乏壓力下,細(xì)胞可通過細(xì)胞自噬獲取能量,度過“難關(guān)”。因此,通過調(diào)節(jié)自噬,或許可以抑制癌癥的發(fā)展和轉(zhuǎn)移,殺死癌細(xì)胞,增強化療藥物的抗腫瘤作用。羅哌卡因是一種臨床上常用的氨基酰胺類局部麻醉藥,主要用于外科手術(shù),分娩和術(shù)后鎮(zhèn)痛。本課題的主要目的是為了探討羅哌卡因是否可以參與癌癥治療新作用以及自噬在其中所扮演的角色。方法:將Hela細(xì)胞和B16細(xì)胞分為對照組（Control）,饑餓組（Starvation,Starv）,羅哌卡因組（Ropivacaine,Rop）,氯喹組（Chloroquine,CQ）,饑餓+羅哌卡因組（Starv+Rop）,饑餓+氯喹組（Starv+CQ）,羅哌卡因+氯喹組（Rop+C... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

機械性疼痛檢測設(shè)備架（左），電子VonFrey觸痛儀（右）

圖 2.羅哌卡因與 CR 聯(lián)合處理對腫瘤生長及癌性痛的影響2.6 組織提取及保存將小鼠用戊巴比妥麻醉（50 mg／kg），將 PBS 緩沖液注入左心室，剪開右心耳使血液流出，隨后在冰上操作完整取出腫瘤，切取部分腫瘤組織放入 4％多聚甲醛中固定。剩余腫瘤組織置于冷凍管中放入液氮速凍保存。在多聚甲醛中固定 4 小時之后的腫瘤組織需要棄去多聚甲醛再用 30%蔗糖溶液（蔗糖 9 g+去離子水定容至30 ml）脫水過夜，棄去，再用 OCT 包埋劑包埋，最后放入-80℃冰箱保存。2.7 免疫印跡實驗2.7.1 細(xì)胞蛋白提取將細(xì)胞接種到細(xì)胞培養(yǎng)板中，細(xì)胞貼壁后處理，收樣時棄去培養(yǎng)基，用 PBS 洗 3遍，棄去，然后向每孔中加入 1×SDS sample buffer 緩沖液 60μl，再用塑料刮仔細(xì)刮下。再用 200μl 移液槍吸盡收集到 1.5 ml 的 EP 管里，放入沸水中煮 15 分鐘，

3. 羅哌卡因引發(fā)自噬體形成 Hela 細(xì)胞用饑餓處理 1.5 小時或者用羅哌卡因（1.5mM）處理 5 小時。 將 B16 細(xì)胞用饑?yán)砘蛴昧_哌卡因（1mM）處理 4 小時。（a）GFP-LC3-HeLa 的免疫熒光圖像或自噬體標(biāo) LC3 的免疫熒光染色（B16 細(xì)胞，綠色）。（b，c）LC3 熒光陽性細(xì)胞百分比的統(tǒng)計結(jié)果d）LC3I，LC3II 和β-actin 的免疫印跡結(jié)果。（e，f）LC3II 與β-actin 的比例的定量。 RO哌卡因，Starv：饑餓。 比例尺=5μm。數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，* p <0.05，** p <0.0** p <0.001。.2 羅哌卡因破壞自噬性溶酶體再生自噬過程中由于自噬溶酶體的形成，溶酶體被大量消耗[7,20]，這一問題可以通LR 過程產(chǎn)生新的溶酶體來解決[21]。在自噬溶酶體完成降解后，自噬溶酶體通LR 過程延伸出一個管狀結(jié)構(gòu)并從上面產(chǎn)生出一個新的溶酶體，然后通過獲得和降解能力成為功能性溶酶體，這對于維持溶酶體穩(wěn)態(tài)是至關(guān)重要的。LAM溶酶體膜蛋白，被用作溶酶體標(biāo)記物。 因此，具有 LAMP1 和 LC3 的重疊信


本文編號：3063424