目的三陰乳腺癌侵襲性強(qiáng),淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高,五年復(fù)發(fā)率高,預(yù)后較差,缺乏相應(yīng)治療靶點(diǎn)。近年來(lái)沉默腫瘤特異性基因的表達(dá)或研發(fā)針對(duì)腫瘤特異性基因的藥物,成為腫瘤基因治療的新方向。衣被蛋白復(fù)合體-亞基β2（coatomer protein complex,subunie beta 2,beta prime,COPB2）,在細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)中發(fā)揮著重要作用。研究發(fā)現(xiàn),COPB2基因在癌組織中高表達(dá),沉默COPB2基因可致細(xì)胞周期阻滯、抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。本實(shí)驗(yàn)的目的是研究COPB2對(duì)三陰乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲的影響及其初步機(jī)制探討。方法1.Western blotting檢測(cè)非三陰乳腺癌MCF-7細(xì)胞和三陰乳腺癌HS-578T細(xì)胞中COPB2的表達(dá);兩種細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)志物表皮鈣粘蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、N-鈣粘蛋白（N-cadherin）的表達(dá)差異。2.MTT實(shí)驗(yàn)、克隆形成實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)非三陰乳腺癌MCF-7細(xì)胞和三陰乳腺癌HS-578T細(xì)胞增殖、遷移、侵襲能力的差異。3.COPB2基因的慢病毒特異性干擾載體sh-COPB2轉(zhuǎn)染人... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

COPB2在乳腺癌中的表達(dá)水平（A）TCGA分析COPB2mRNA在乳腺癌組織及其癌旁組織中的表達(dá)（t-test，***P<0.001）

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文沉默COPB2基因?qū)θ巳幦橄侔┘?xì)胞增殖、遷移、侵襲的影響18圖2HS-578T和MCF-7細(xì)胞的生物學(xué)特點(diǎn)（A）MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)24h、48h、72h、96h和120h時(shí)，MCF-7、HS-578T細(xì)胞的增殖能力（n=3，t-test，*P<0.05，***P<0.001）。（B）克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MCF-7、HS-578T細(xì)胞的克隆形成能力，右側(cè)柱狀圖為三次獨(dú)立重復(fù)實(shí)驗(yàn)定量分析（n=3，t-test，***P<0.001）。（C）Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MCF-7、HS-578T細(xì)胞的遷移能力（×200），右側(cè)柱狀圖為三次獨(dú)立重復(fù)實(shí)驗(yàn)定量分析（n=3，t-test，***P<0.001）。（D）Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MCF-7、HS-578T細(xì)胞的侵襲能力（×200），右側(cè)柱狀圖為三次獨(dú)立重復(fù)實(shí)驗(yàn)定量分析（n=3，t-test，**P<0.01）。（E）WesternBlotting檢測(cè)MCF-7和HS-578T中E-Ca、Vimentin、N-Ca蛋白表達(dá)水平，右側(cè)柱狀圖為三次獨(dú)立重復(fù)實(shí)驗(yàn)定量分析（n=3，t-test，***P<0.001）。3慢病毒介導(dǎo)的shRNA沉默HS-578T細(xì)胞中的COPB23.1熒光顯微鏡觀察HS-578T細(xì)胞感染效率HS-578T細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力都強(qiáng)于MCF-7細(xì)胞，且HS-578T細(xì)胞中COPB2表達(dá)高于MCF-7細(xì)胞，為進(jìn)一步研究COPB2與細(xì)胞增殖、侵襲和遷移能力的關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)選擇HS-578T細(xì)胞為研究對(duì)象。慢病毒包裝的COPB2shRNA感染HS-578T細(xì)胞96h后，熒光顯微鏡下觀察感染情況，轉(zhuǎn)染效率大于80%，達(dá)到預(yù)期感染效果(圖3A)。3.2Westernblotting檢測(cè)慢病毒感染細(xì)胞后COPB2的表達(dá)情況慢病毒感染HS-578T細(xì)胞96h后，Westernblotting檢測(cè)COPB2的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，慢病毒感染以后，與Parental組相比，sh-COPB2組中COPB2蛋白水平顯著下降(P<0.01)，與sh-Control組相比，sh-COPB2組中COPB2蛋白水平顯著下降(P<0.05)(圖3B)。結(jié)果提示，慢病毒介導(dǎo)的shRNA能夠有效沉默HS-578T細(xì)胞中COPB2的表達(dá)?

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文沉默COPB2基因?qū)θ巳幦橄侔┘?xì)胞增殖、遷移、侵襲的影響19圖3慢病毒介導(dǎo)的shRNA沉默HS-578T細(xì)胞中的COPB2（A）熒光顯微鏡觀察HS-578T細(xì)胞中慢病毒感染效率大于80%。（B）WesternBlotting檢測(cè)慢病毒感染后HS-578T細(xì)胞COPB2蛋白表達(dá)水平，右側(cè)柱狀圖為三次獨(dú)立重復(fù)實(shí)驗(yàn)定量分析（n=3，t-test，*P<0.05，**P<0.01以Parental組為標(biāo)準(zhǔn)化成1.0進(jìn)行定量分析）。4COPB2基因沉默對(duì)HS-578T細(xì)胞增殖的影響4.1MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HS-578T細(xì)胞增殖能力慢病毒轉(zhuǎn)染后，MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)24h、48h、72h、96h、120h細(xì)胞的增殖能力。結(jié)果顯示，與Parental組及sh-Control組相比，48h、72h、96h、120h時(shí)，sh-COPB2組細(xì)胞增殖能力明顯降低(P<0.05，P<0.001)(圖4A)。4.2HS-578T細(xì)胞克隆形成能力慢病毒轉(zhuǎn)染后，克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的克隆形成能力，顯微鏡下計(jì)數(shù)克隆球，結(jié)果顯示，與親本細(xì)胞組及空質(zhì)粒對(duì)照組相比，沉默組克隆形成能力明顯降低(P<0.001)(圖4B)。Parentalsh-Controlsh-COPB2COPB2GAPDH

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]乳腺癌手術(shù)治療回顧和進(jìn)展[J]. 張彥收,劉運(yùn)江.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2015(05)
[4]Akt/PKB信號(hào)通路調(diào)控機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 趙學(xué)芹,黃憲章.  廣東醫(yī)學(xué). 2009(12)
[5]N-cadherin knock-down decreases invasiveness of esophageal squamous cell carcinoma in vitro[J]. Ke Li,Wei He,Na Lin,Xin Wang,Qing-Xia Fan,Department of Oncology,the First Affiliated Hospital,Zhengzhou University,Zhengzhou 450052,Henan Province,China.  World Journal of Gastroenterology. 2009(06)

博士論文
[1]COPB2基因沉默通過(guò)JNK/c-Jun信號(hào)通路抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)凋亡并提高細(xì)胞對(duì)常山酮的敏感性[D]. 王燕.蘭州大學(xué) 2018



本文編號(hào)：3054621