目的:本研究旨在體外探討沉默Aurora-B基因表達通過PI3K/Akt/NF-κB信號通路對人骨肉瘤細胞的侵襲和遷移的影響。方法:構建干擾Aurora-B基因表達的慢病毒載分別命名為LV-shAURKB（LV-shAURKB-1、LV-shAURKB-2、LV-shAURKB-3）和陰性對照載體LV-NC。分別轉染人骨肉瘤細胞株U2-OS細胞和HOS細胞。qRT-PCR檢測Aurora-B基因的mRNA水平。Transwell侵襲實驗和劃痕愈合實驗檢測U2-OS細胞和HOS細胞侵襲和遷移情況。采用免疫組化方法研究24例伴有肺轉移的骨肉瘤標本中Aurora-B和p-Akt（Ser473）蛋白的表達情況,并分析它們的相關性。Western Blot檢測轉染LV-shAURKB后Aurora-B、p-Akt（Ser473）、Akt、p-PI3K（Tyr199）、PI3K、NF-κB（p65）、β-actin蛋白表達水平。結果:①qRT-PCR和Western Blot實驗結果顯示與對經轉染陰照載體組對比,轉染了LV-shAURKB組骨肉瘤細胞的Aurora-B的mRNA和蛋白水平明顯降低;... 

【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英文縮略詞表
第1章 前言
第2章 材料和方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞來源
        2.1.2 慢病毒載體來源
        2.1.3 主要試劑與材料
    2.2 主要軟件
    2.3 主要儀器
    2.4 常用試劑的配置
    2.5 免疫組化
    2.6 慢病毒shRNA重組表達載體的構建與測序
    2.7 細胞復蘇、培養(yǎng)傳代、凍存、轉染
    2.8 Western Blot法分析U2-OS細胞和HOS細胞Aurora-B、PI3K、p-PI3K（Tyr199）、Akt、p-Akt（Ser473）、NF-κB（p65）的表達
    2.9 qRT-PCR法分析各組人U2-OS細胞和HOS細胞內Aurora-B的表達
    2.10 劃痕愈合實驗
    2.11 Transwell侵襲實驗
    2.12 統(tǒng)計學方法
第3章 結果
    3.1 shAURKB干擾載體測序結果
    3.2 LV-shAURKB慢病毒載體轉染抑制骨肉瘤細胞Aurora-B的表達
    3.3 沉默Aurora-B的表達水平能夠抑制骨肉瘤細胞株U2-OS細胞和HOS細胞的侵襲能力
    3.4 沉默Aurora-B的表達水平能夠抑制骨肉瘤細胞株U2-OS細胞和HOS細胞的遷移能力
    3.5 骨肉瘤組織標本中Aurora-B和p-Akt（Ser473）的相關性
    3.6 沉默Aurora-B對PI3K/Akt/NF-κB信號通路相關蛋白的影響
第4章 討論
第5章 結論與展望
致謝
參考文獻
附圖
攻讀學位期間的研究成果
綜述
    參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Aurora-B激酶及其抑制劑研究進展[J]. 董丹丹,肖燕燕,劉偉,周紅剛,楊誠.  藥學學報. 2013(04)
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[3]慢病毒載體介導RNAi的研究進展[J]. 李英明,陳燕慧.  生物技術通報. 2009(07)



本文編號：3051121