目的:研究低氧對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞肥大化的影響,明確可維持軟骨細(xì)胞表型的最佳氧氣濃度,為構(gòu)建具有正常功能的組織工程化軟骨細(xì)胞的培養(yǎng)體系提供依據(jù)。方法:分離提取骨性關(guān)節(jié)炎、股骨頸骨折和股骨頭壞死患者的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,RT-q PCR檢測(cè)不同疾病患者來(lái)源軟骨細(xì)胞COL1A1、COL2A1、COL10A1、MMP-13、IHH和PTHr P基因的m RNA表達(dá)情況,通過(guò)免疫熒光染色檢測(cè)軟骨細(xì)胞內(nèi)COLⅠ、COLⅡ和COLⅩ蛋白水平。利用甲苯胺藍(lán)染色鑒定培養(yǎng)后的P0代軟骨細(xì)胞表型。利用RT-q PCR比較P0-P3代軟骨細(xì)胞COL1A1、COL2A1、COL10A1、MMP-13、IHH和PTHr P基因的m RNA表達(dá)水平。利用不同TGF-β1濃度（5ng/m L、15ng/m L）和氧氣濃度（2%、20%）處理軟骨細(xì)胞,檢測(cè)COL1A1、COL2A1、COL10A1、MMP-13、IHH和PTHr P基因的m RNA表達(dá)情況及軟骨細(xì)胞線粒體復(fù)合酶Ⅰ的活性。結(jié)果:與股骨頸骨折軟骨細(xì)胞相比,骨性關(guān)節(jié)炎、股骨頭壞死軟骨細(xì)胞COL1A1表達(dá)水平分別提高（12.78±2.24）倍和（7.58±2... 

【文章來(lái)源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

軟骨細(xì)胞鏡下觀(100×，標(biāo)尺：100μm)

（圖 4.2）股骨頸骨折軟骨細(xì)胞、OA 軟骨細(xì)胞、股骨頭壞死軟骨細(xì)胞 COL1A1、COL2A1、COL10A1、MMP-13、IHH、PTHrP 表達(dá)量（*P<0.05、** P<0.01）4.3 未經(jīng)培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞免疫熒光染色為了比較股骨頸骨折軟骨細(xì)胞和 OA 軟骨細(xì)胞內(nèi) COLⅠ、COLⅡ、COLⅩ蛋白水平的差異，而采取了免疫熒光染色。發(fā)現(xiàn)股骨頸骨折軟骨細(xì)胞的 COLⅡ熒光信號(hào)強(qiáng)于 OA 軟骨細(xì)胞，而 OA 軟骨細(xì)胞的 COLⅠ、COLⅩ熒光信號(hào)強(qiáng)于股骨頸骨折軟骨細(xì)胞。這表明股骨頸骨折軟骨細(xì)胞內(nèi) COLⅡ含量高，而 COLⅠ、COLⅩ含量較低，具有正常軟骨細(xì)胞的表型；也從側(cè)面反映 OA 軟骨細(xì)胞失去了正常軟骨細(xì)胞的表型，結(jié)果如圖 4.3 所示。綜上分析，我們將以股骨頸骨折軟骨細(xì)胞作為培養(yǎng)、研究的對(duì)象。

17圖4.3 COLⅠ、COLⅡ、COLⅩ蛋白水平通過(guò)免疫熒光來(lái)表征。COLⅠ的免疫熒光染色為紅色，COLⅡ的免疫熒光染色為綠色，COLⅩ的免疫熒光染色為橘黃色。細(xì)胞核用DAPI染色顯示為藍(lán)色（放大倍數(shù)400×，標(biāo)尺：20μm）4.4 培養(yǎng)后的軟骨細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色鑒定取已經(jīng)培養(yǎng)好的P0代股骨頸骨折軟骨細(xì)胞進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色鑒定。正常軟


本文編號(hào)：2992247