目的:腎上腺皮質(zhì)激素可引起激素性股骨頭缺血壞死,其機制復(fù)雜,目前研究表明,血管內(nèi)皮細胞損傷、差異表達基因的調(diào)控以及骨細胞自噬等參與了SANFH的發(fā)病過程。但血管內(nèi)皮細胞與自噬之間的關(guān)系及調(diào)控機制尚不明確。本研究旨在探討血管內(nèi)皮細胞自噬在SANFH中的作用,通過研究PI3K/Akt/mTOR信號通路和自噬相關(guān)基因來探討股骨頭血管內(nèi)皮細胞自噬與SANFH之間的關(guān)系,同時研究mTOR-shRNA對血管內(nèi)皮細胞損傷可能具有的修復(fù)作用。方法:研究采用體外培養(yǎng)大鼠股骨頭血管內(nèi)皮細胞的方法,同時進行mTOR-shRNA腺病毒轉(zhuǎn)染,分組后于4個時間點（12、24、48、72h）利用透射電鏡觀察各組自噬體形成情況;利用RT-PCR檢測PI3K、Akt、mTOR、Beclin1、MAP1LC3的mRNA表達;利用Western blot、免疫熒光法檢測上述因子的蛋白表達情況;利用ELISA法檢測血管內(nèi)皮細胞損傷標(biāo)志物6-keto-PGF1α表達情況。最后應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)方法進行分析,統(tǒng)計各時間點實驗組與對照組之間是否有統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)果:（1）激素抑制了VEC生理性自噬,mTOR-shRNA可增強自噬水平;（2）... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

VEC細胞CD31和FactorⅧ蛋白染色情況

內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文素抑制了 VEC 生理性自噬，mTOR-shRNA 可增強自噬水平們采用透射電鏡進行 VEC 自噬體觀察，由圖 2 可見，三組視野內(nèi)均可見自照組為生理性自噬強度，激素組（MP）中自噬體數(shù)量明顯少于對照組，mTOR 組則介于這兩組之間，說明甲基強的松龍可抑制 VEC 自噬，作用制自噬的效果也越明顯。而 mTOR-shRNA 可使 mTOR 表達下調(diào)，抑制了對自噬的抑制作用，增強了自噬水平，但其仍低于生理性自噬水平。ctrl MP MP+shmTOR

RT-PCR定量檢測PI3K、Akt、mTOR、Beclin1、LC3的mRNA表達變化

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：2989813