SRT1720在骨癌痛中的作用及病理機(jī)制研究
發(fā)布時(shí)間：2021-01-11 10:57
目的:骨癌痛（BCP）是由原發(fā)性骨癌或腫瘤轉(zhuǎn)移引起的疼痛。越來(lái)越多的證據(jù)及我們以前的研究表明,沉默信息調(diào)節(jié)因子1（SIRT1）參與了BCP的外周致敏和中樞敏化,SIRT1在骨癌疼痛中的潛在機(jī)制可能為疼痛治療提供一定的線索。SRT1720是SIRT1選擇性激活劑,本文研究了SRT1720在病理性疼痛中的作用及分子機(jī)制。方法:將27只雌性SD大鼠隨機(jī)分為Sham組,BCP組和BCP+SRT1720組,BCP組和BCP+SRT1720組通過(guò)將MRMT-1大鼠乳腺癌細(xì)胞注入到左脛骨中以建立乳腺癌的骨轉(zhuǎn)移疼痛模型,Sham組在相同位置注入相同體積的HBSS。通過(guò)脛骨X光片,HE染色觀察BCP組大鼠骨破壞程度,機(jī)械痛測(cè)試進(jìn)行驗(yàn)證。建模12天后,SRT1720組鞘內(nèi)注射SRT1720,Sham組和BCP組注射相同體積的DMSO+生理鹽水（體積比1:1）,各組給藥后0、1、3、5、7、12、18和24 h檢測(cè)50%縮足閾值（PWT）;給藥12 h后處死,通過(guò)Western Blot、免疫熒光、ELISA等實(shí)驗(yàn)方法檢驗(yàn)各組相關(guān)蛋白的變化水平;采用TUNEL法檢測(cè)BCP模型大鼠細(xì)胞凋亡情況。在體外實(shí)驗(yàn)中,...
【文章來(lái)源】： 郝苗苗 湖北科技學(xué)院
【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
脛骨內(nèi)注射MRMT-1細(xì)胞誘導(dǎo)了BCP大鼠的骨破壞和機(jī)械性異常疼痛
212鞘內(nèi)注射SRT1720可降低BCP誘導(dǎo)的脊髓細(xì)胞凋亡信號(hào)脊髓背角對(duì)于處理包括疼痛知覺(jué)在內(nèi)的感覺(jué)信息至關(guān)重要[32]。因此，我們檢測(cè)了骨癌發(fā)生時(shí)脊髓背角的變化。組織學(xué)檢查顯示，與Sham組相比，BCP組的脊髓背角炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)增加（圖2A）。該結(jié)果表明BCP誘導(dǎo)了脊髓的異常改變。TUNEL測(cè)定法旨在檢測(cè)凋亡后期階段發(fā)生大量DNA降解的凋亡細(xì)胞[33]。Sham組大鼠的脊髓背角顯示很少的TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞，而B(niǎo)CP大鼠脊髓背角的TUNEL信號(hào)顯著增加（圖2B）。同時(shí)，與Sham大鼠相比，BCP大鼠的凋亡相關(guān)因子失調(diào)。BCP降低了抗凋亡因子Bcl-2的表達(dá)，增強(qiáng)了促凋亡因子BAX和介導(dǎo)凋亡相關(guān)底物裂解的caspase-3的表達(dá)水平（圖2C–E）。這些結(jié)果表明BCP大鼠脊髓中的細(xì)胞凋亡被激活。將SRT1720（一種選擇性SIRT1激動(dòng)劑）鞘內(nèi)注射到BCP大鼠的脊髓中。處理12小時(shí)后，檢測(cè)其Bcl-2、BAX和caspase-3的表達(dá)。結(jié)果表明，SRT1720處理可上調(diào)BCP大鼠脊髓的Bcl-2表達(dá)，下調(diào)BAX和caspase-3的表達(dá)。這些數(shù)據(jù)表明，SRT1720抑制了BCP大鼠脊髓中的凋亡信號(hào)。圖2.SRT1720對(duì)脊髓細(xì)胞凋亡信號(hào)的影響A.HE脊髓染色在Sham大鼠和BCP大鼠中均顯示出炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。B.TUNEL法檢測(cè)Sham組和BCP組大鼠脊髓背側(cè)凋亡細(xì)胞。比例尺=100μm。C.Sham，BCP和BCP+SRT1720大鼠脊髓中BAX蛋白含量的ELISA分析。*p<0.05vsSham組，＃p<0.05vsBCP組。（D,
3 SRT1720 逆轉(zhuǎn) BCP 對(duì) SIRT1 活性的抑制作用 蛋白質(zhì)印跡分析了 Sham 組大鼠，BCP 組大鼠和 BCP+SRT1720 組大鼠的脊髓中 SIRT1 的表達(dá)和活性（圖 3）。SIRT1 的活性以 Ser47 處磷酸化的 SIRT1 表達(dá)水平表示[34]。如圖 3 所示，BCP 組中總水平和磷酸化的 SIRT1 均降低，而SRT1720 處理恢復(fù)了磷酸化型 SIRT1（pSIRT1）的表達(dá)量。BCP+SRT1720 組大鼠中 pSIRT1/SIRT1 的相對(duì)值為 1.38±0.06（與 BCP 組相比，p <0.05，圖 3D），表明 SIRT1 活性增加。這些結(jié)果表明，SIRT1 在 BCP 中的表達(dá)和活性均降低，而 SRT1720 則激活 SIRT1 的活性。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]SIRT1在小鼠腎缺血再灌注損傷中的作用及其對(duì)NF-κBp65-PGC-1α信號(hào)通路的影響[J]. 李璐,楊晶,張穎,蔣甘孺,孫京華,李勝開(kāi),尹忠誠(chéng). 中華腎臟病雜志. 2015 (02)
本文編號(hào)：2970643
【文章來(lái)源】： 郝苗苗 湖北科技學(xué)院
【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
脛骨內(nèi)注射MRMT-1細(xì)胞誘導(dǎo)了BCP大鼠的骨破壞和機(jī)械性異常疼痛
212鞘內(nèi)注射SRT1720可降低BCP誘導(dǎo)的脊髓細(xì)胞凋亡信號(hào)脊髓背角對(duì)于處理包括疼痛知覺(jué)在內(nèi)的感覺(jué)信息至關(guān)重要[32]。因此，我們檢測(cè)了骨癌發(fā)生時(shí)脊髓背角的變化。組織學(xué)檢查顯示，與Sham組相比，BCP組的脊髓背角炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)增加（圖2A）。該結(jié)果表明BCP誘導(dǎo)了脊髓的異常改變。TUNEL測(cè)定法旨在檢測(cè)凋亡后期階段發(fā)生大量DNA降解的凋亡細(xì)胞[33]。Sham組大鼠的脊髓背角顯示很少的TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞，而B(niǎo)CP大鼠脊髓背角的TUNEL信號(hào)顯著增加（圖2B）。同時(shí)，與Sham大鼠相比，BCP大鼠的凋亡相關(guān)因子失調(diào)。BCP降低了抗凋亡因子Bcl-2的表達(dá)，增強(qiáng)了促凋亡因子BAX和介導(dǎo)凋亡相關(guān)底物裂解的caspase-3的表達(dá)水平（圖2C–E）。這些結(jié)果表明BCP大鼠脊髓中的細(xì)胞凋亡被激活。將SRT1720（一種選擇性SIRT1激動(dòng)劑）鞘內(nèi)注射到BCP大鼠的脊髓中。處理12小時(shí)后，檢測(cè)其Bcl-2、BAX和caspase-3的表達(dá)。結(jié)果表明，SRT1720處理可上調(diào)BCP大鼠脊髓的Bcl-2表達(dá)，下調(diào)BAX和caspase-3的表達(dá)。這些數(shù)據(jù)表明，SRT1720抑制了BCP大鼠脊髓中的凋亡信號(hào)。圖2.SRT1720對(duì)脊髓細(xì)胞凋亡信號(hào)的影響A.HE脊髓染色在Sham大鼠和BCP大鼠中均顯示出炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。B.TUNEL法檢測(cè)Sham組和BCP組大鼠脊髓背側(cè)凋亡細(xì)胞。比例尺=100μm。C.Sham，BCP和BCP+SRT1720大鼠脊髓中BAX蛋白含量的ELISA分析。*p<0.05vsSham組，＃p<0.05vsBCP組。（D,
3 SRT1720 逆轉(zhuǎn) BCP 對(duì) SIRT1 活性的抑制作用 蛋白質(zhì)印跡分析了 Sham 組大鼠，BCP 組大鼠和 BCP+SRT1720 組大鼠的脊髓中 SIRT1 的表達(dá)和活性（圖 3）。SIRT1 的活性以 Ser47 處磷酸化的 SIRT1 表達(dá)水平表示[34]。如圖 3 所示，BCP 組中總水平和磷酸化的 SIRT1 均降低，而SRT1720 處理恢復(fù)了磷酸化型 SIRT1（pSIRT1）的表達(dá)量。BCP+SRT1720 組大鼠中 pSIRT1/SIRT1 的相對(duì)值為 1.38±0.06（與 BCP 組相比，p <0.05，圖 3D），表明 SIRT1 活性增加。這些結(jié)果表明，SIRT1 在 BCP 中的表達(dá)和活性均降低，而 SRT1720 則激活 SIRT1 的活性。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]SIRT1在小鼠腎缺血再灌注損傷中的作用及其對(duì)NF-κBp65-PGC-1α信號(hào)通路的影響[J]. 李璐,楊晶,張穎,蔣甘孺,孫京華,李勝開(kāi),尹忠誠(chéng). 中華腎臟病雜志. 2015 (02)
本文編號(hào)：2970643
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