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槲皮素對(duì)軟骨細(xì)胞的生物學(xué)調(diào)控及其機(jī)理研究

發(fā)布時(shí)間:2020-12-18 08:57
  研究目的:軟骨缺損治療的難點(diǎn)在于軟骨組織難以進(jìn)行自主修復(fù)。本研究旨在探討槲皮素對(duì)于軟骨細(xì)胞增殖能力、表型維持的影響,并進(jìn)一步探討其對(duì)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路調(diào)控的分子學(xué)機(jī)制,為槲皮素在軟骨組織工程中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。研究方法:通過(guò)噻唑藍(lán)法檢測(cè)槲皮素對(duì)軟骨細(xì)胞毒性及增殖能力的影響;通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)軟骨特異性基因的表達(dá),包括:蛋白聚糖(Aggrecan)、II型膠原、SRY相關(guān)的HMG盒基因9(SRY (sex determining region Y)-box 9, SOX9)。通過(guò)甲苯胺藍(lán)及阿利新藍(lán)染色檢測(cè)槲皮素對(duì)軟骨細(xì)胞的外基質(zhì)分泌的影響。通過(guò)蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)槲皮素對(duì)MAPK及AKT通路的影響并探究各通路間相互關(guān)系。在抑制相關(guān)信號(hào)通路的條件下,通過(guò)RT-PCR、細(xì)胞外基質(zhì)染色驗(yàn)證槲皮素對(duì)于軟骨細(xì)胞相關(guān)表型的影響。研究結(jié)果:槲皮素在一定濃度條件下可促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖及軟骨表型的維持。在0.5-10μM時(shí)槲皮素可促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖;在0.5-5μM時(shí)槲皮素可促進(jìn)軟骨相關(guān)特異性基因的表達(dá)及軟骨基質(zhì)的分泌,其中濃度為1.5μM時(shí)藥物效應(yīng)最佳。槲皮素還可激活MAPK下... 

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