顱腦創(chuàng)傷(Traumatic Brain Injury,TBI)致死率、致殘率居高不下,從輕型到重型TBI均給患者和家屬帶來沉重的負擔。戰(zhàn)爭時期,TBI是士兵傷亡類型中的主要形式,其具備表現的多樣性、發(fā)展的迅速性、預后差異性等特點。TBI后會伴隨著局部腦組織缺血、缺氧及血腦屏障(blood brain barrier,BBB)的破壞最終會導致腦組織的水腫,而腦水腫又加重神經細胞缺血、缺氧的程度,形成惡性循。隨著交通的發(fā)達,車禍所致的顱腦損傷也逐年增加,如何進一步提高TBI后患者的救治,將成為國內外神經外科醫(yī)生研究的熱點。相關研究表明,缺血預處理對維持BBB的完整通透性和減輕腦細胞水腫程度發(fā)揮作用,對改善其預后產生積極作用。缺氧預處理(Hypoxic Preconditioning,HPC)是指給予短時間單次或多次缺氧刺激后,可在機體各個組織內激發(fā)自身保護作用,在抗缺血、缺氧的神經保護功能上發(fā)揮作用;同時其具備安全、有效、可重復等特點。HPC對神經元細胞起到保護作用,維持BBB完整性從而減低了腦水腫發(fā)生的程度,目前關于HPC在TBI后干預腦細胞的重構與保護機理尚處在研究階段,神外�？祁I域也少有報道。鞘氨醇激酶1(Sphingosine kinase 1,SphK1)是體內將鞘氨醇(sphingosine Sph)催化為1-磷酸鞘氨醇(Sphingosine 1-phosphate,S1P)的一種關鍵酶,SphK2因其催化活性以及細胞的特殊定位而影響著細胞內鈣離子水平及神經細胞凋亡,在腦損傷后其表達的上調對腦神經細胞損傷起到保護作用~([1])。本實驗旨在觀察缺氧預處理(HPC)對于創(chuàng)傷性腦損傷大鼠腦組織中SphK2的表達變化以及對神經元細胞凋亡的影響,為TBI后患者成功的救治提供基礎理論依據。第一部分創(chuàng)傷性腦損傷大鼠腦組織SphK2表達變化以及血腦屏障通透性變化的實驗研究目的探討創(chuàng)傷性腦損傷大鼠腦組織中鞘氨醇激酶2表達及血腦屏障(blood brain barrier,BBB)的變化規(guī)律。方法108只大鼠(成年雄性健康Sprague-Dawley大鼠)隨機分組為創(chuàng)傷性腦損傷組(TBI組n=96)以及對照組(Con組n=12),采用改良的Feeney’s自由落體打擊法建立大鼠創(chuàng)傷性腦損傷(TBI)模型。TBI組于傷后1h、4h、8h、12h、24h、3d、7d、14d斷頭處死。Con組僅做頭皮切開縫合處理。分別應用逆轉錄多聚酶鏈反應(RT-PCR)、蛋白質印跡法(Western-Blotting)及免疫組化檢測各組大鼠挫傷區(qū)周圍皮層腦組織鞘氨醇激酶2的表達變化、干濕重法測腦組織含水量、免疫組化IgG法檢測血腦屏障通透性變化情況。結果RT-PCR法檢測SphK2 mRNA發(fā)現,在TBI后1h即開始表達,12h達到峰值狀態(tài),1d-14d呈下降趨勢;傷后1h-7dTBI組表達較Con組明顯增加,兩組比較差異有統(tǒng)計學意義。Western-Blotting法檢測蛋白情況發(fā)現,TBI組傷后1h開始出現SphK2蛋白表達,4h-12h呈上升趨勢,傷后12h達峰值,1d-14天呈下降趨勢。其中TBI組傷后1h-14d SphK2蛋白表達較Con組(0.18±0.10)明顯增加,兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。IgG染色及免疫組化染色發(fā)現傷后1h出現陽性細胞表達,12小時黃染最為明顯,傷后1d-14d染色逐漸變淡,干濕重法測腦細胞含水量發(fā)現,1h-1d呈上升趨勢,3d達峰值,隨后逐漸下降,傷后1h-7d TBI組與Con組腦組織水含量比較,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),傷后14d兩組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論大鼠遭受顱腦創(chuàng)傷后血腦屏障的完整性受到破壞,同時應激性的導致SphK2表達增加,SphK2表達增加可能在維持血腦屏障的完整性方面起重要作用。第二部分SphK-2參與缺氧預處理減輕大鼠顱腦創(chuàng)傷后神經細胞凋亡的實驗研究目的探討HPC對大鼠TBI后SphK2的表達及神經細胞凋亡的影響,研究HPC參與大鼠顱腦創(chuàng)傷后的腦保護機制。方法選取健康成年(S-D)大鼠204只,體重范圍約260-290 g,均購于安徽醫(yī)科大學實驗動物中心,由實驗室動物LAB精心管理喂養(yǎng),大鼠均為健康成年大鼠(根據毛發(fā)判斷),按科學標準精心飼養(yǎng),定時、定餐、定量喂食水,大鼠生活環(huán)境為我院實驗室多層鐵籠裝置,保持室內通風同時維持室溫范圍在23--25℃之間。采用隨機數字法分成缺氧預處理后致顱腦創(chuàng)傷組(HPC組)96只及單純TBI組96只,對照組(Con組)12只,其中HPC組和單純TBI組分為傷后1h,4h,8h,12h,1d,3d,7d,14d 8個亞組,每個亞組12只。采用改良的Feeney’s方式(同前)制作TBI實驗模型,將大鼠預先予以低壓氧倉內訓練3h/d,連續(xù)3d制作HPC動物模型,采用IgG法免疫組化染色、實時定量聚合酶鏈式反應(RT-PCR)及Western Blotting方法檢測鞘氨醇激酶2(SphK2)基因及蛋白的表達、TUNEL法染色檢測神經細胞凋亡的變化情況。結果(1)正常腦組織(con組)IgG無染色,TBI組腦外傷后1h即可見IgG輕微染色陽性細胞,傷后4h-8h染色逐漸變深,12h IgG黃染最明顯,1d-14d呈下降趨勢,傷后1h-7d HPC組IgG評分均低于TBI組,兩組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(2)RT-PCR及Western Blotting法檢測結果顯示,SphK-2在顱腦外傷后1h開始表達,4h-8h表達逐漸升高,12h到達峰值,1d-14d表達呈下降趨勢,傷后1h-7d時間段SphK2 mRNA及蛋白表達HPC組比TBI組明顯升高,兩組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05))。(3)TUNEL染色檢測神經細胞凋亡發(fā)現,單純TBI組和HPC組于顱腦損傷后1d凋亡細胞開始表達,3d達最高峰,傷后3d-7d時間段呈下降趨勢。神經細胞凋亡率HPC組較單純TBI組明顯減低,兩組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論HPC顯著增加大鼠腦損傷后Sphk2表達,降低神經細胞凋亡,從而發(fā)揮腦保護的作用。
【學位單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R651.15
【文章目錄】：
英文縮寫對照表
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 創(chuàng)傷性腦損傷大鼠腦組織SphK2表達變化以及血腦屏障通透性變化的實驗研究
    1 材料與方法
    2.相關實驗結果
    3.討論
    4.結論
第二部分 SphK2參與缺氧預處理減輕大鼠顱腦創(chuàng)傷后表達變化及神經細胞凋亡的實驗研究
    1 材料與方法
    2.實驗結果
    3.討論
    4.結論
全文總結
參考文獻
附錄
致謝
綜述
    參考文獻

【參考文獻】

相關期刊論文 前6條

1 Hui Xiao;Yang Yang;Ji-hui Xi;Zi-qian Chen;;Structural and functional connectivity in traumatic brain injury[J];Neural Regeneration Research;2015年12期

2 Min Ni;Xiao-Lei Shi;Zhi-Gang Qu;Hong Jiang;Zi-Qian Chen;Jun Hu;;Epithelial mesenchymal transition of non-small-cell lung cancer cells A549 induced by SPHK1[J];Asian Pacific Journal of Tropical Medicine;2015年02期

3 Jong Kuk Kim;Hye Jeong Lee;Hwan Tae Park;;Two faces of Schwann cell dedifferentiation in peripheral neurodegenerative diseases:pro-demyelinating and axon-preservative functions[J];Neural Regeneration Research;2014年22期

4 肖敏;吳顯勁;蔡木發(fā);易偉蓮;;鞘氨醇激酶2抑制5-氟尿嘧啶誘導的人結腸癌HCT116細胞凋亡[J];第二軍醫(yī)大學學報;2014年10期

5 姚寅生;劉家傳;楊艷艷;王金標;張永明;張星;王春琳;;缺氧預處理對創(chuàng)傷性腦損傷大鼠Claudin-5表達及血-腦屏障通透性的影響[J];中國微侵襲神經外科雜志;2014年04期

6 武孝剛;劉家傳;楊艷艷;王金標;張永明;張星;王春琳;周治民;;缺氧預處理誘導創(chuàng)傷性腦損傷大鼠皮層組織HIF-1α及GLUT-1表達的影響[J];中華神經醫(yī)學雜志;2014年04期

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1 覃琳;SphK1基因沉默對結腸癌RKO細胞化療敏感性的影響[D];廣西醫(yī)科大學;2017年

本文編號：2879957