目的:全骨髓貼壁法體外培養(yǎng)BMSCs,構(gòu)建大鼠尾椎間盤退變模型,觀察脊伸痹通方聯(lián)合BMSCs移植對(duì)退變椎間盤修復(fù)及CXCR4、NF-κB表達(dá)的影響。方法:從大鼠股骨骨髓中提取BMSCs,全骨髓貼壁法體外培養(yǎng)至P3代,通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察、細(xì)胞表面標(biāo)志物檢測(cè)、增殖情況觀測(cè)對(duì)其鑒定,液氮中凍存以待后續(xù)移植使用。采用經(jīng)皮纖維環(huán)穿刺法制造大鼠尾椎間盤退變模型,磁共振動(dòng)態(tài)檢測(cè)其退變情況。選取50只處于同一退變程度的造模大鼠,將其隨機(jī)分成5組。具體干預(yù)方法為:A組:尾靜脈BMSCs移植+高劑量“脊伸痹通方”中藥湯劑灌胃;B組:尾靜脈BMSCs移植+中劑量“脊伸痹通方”中藥湯劑灌胃;C組:尾靜脈BMSCs移植+低劑量“脊伸痹通方”中藥湯劑灌胃;D組:尾靜脈BMSCs移植+等體積純水灌胃;E組:尾靜脈PBS液注射+純水灌胃。干預(yù)1月后復(fù)查磁共振,聯(lián)合HE染色觀察退變椎間盤修復(fù)情況。ELISA法檢測(cè)血清、椎間盤中CXCR4、NF-κB的表達(dá)情況。結(jié)果:全骨髓貼壁法體外培養(yǎng)的大鼠P3代BMSCs,形態(tài)學(xué)觀察顯示其結(jié)構(gòu)均一性較高,有較強(qiáng)的增殖能力。通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù),對(duì)于經(jīng)典的細(xì)胞表面標(biāo)志物進(jìn)行鑒定,證實(shí)為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。經(jīng)皮纖維環(huán)穿刺法制造的大鼠尾椎間盤退變多為改良Thompson分級(jí)Ⅲ級(jí)。治療1月后,經(jīng)磁共振檢測(cè)及HE染色得知,脊伸痹通方聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植能夠有效延緩大鼠尾椎間盤退變,且較單純骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植效果更好。各組動(dòng)物椎間盤、血清中均有CXCR4、NF-κB表達(dá)。同一組的血清中CXCR4、NF-κB含量顯著高于椎間盤中的含量(p0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;經(jīng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植的A～D組各組的CXCR4、NF-κB表達(dá)顯著高于空白對(duì)照的E組(p0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。脊伸痹通方聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療的高劑量組(A組)、中劑量組(B組)以及低劑量組(C組)均可促進(jìn)CXCR4、NF-κB的表達(dá),且呈濃度依賴性。結(jié)論:全骨髓貼壁法能夠培養(yǎng)出純度較高、增殖良好的P3代BMSCs。經(jīng)皮纖維環(huán)穿刺法制造的大鼠尾椎間盤退變模型操作簡(jiǎn)單、損傷小、造模成功率高、可行性強(qiáng)。磁共振具有安全、無(wú)輻射、無(wú)骨偽影、對(duì)比度高等優(yōu)點(diǎn),可用于動(dòng)物椎間盤退變相關(guān)性疾病的檢測(cè)。結(jié)合組織學(xué)染色技術(shù),能夠更加客觀的進(jìn)行椎間盤退變程度評(píng)估。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植能夠延緩椎間盤退變,聯(lián)合脊伸痹通方可提高其修復(fù)能力,脊伸痹通方聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植修復(fù)椎間盤退變的機(jī)制可能與上調(diào)CXCR4、NF-κB的表達(dá)有關(guān)。
【學(xué)位單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R681.5
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 理論研究
    1. 祖國(guó)醫(yī)學(xué)對(duì)椎間盤退變的認(rèn)識(shí)
    2. 祖國(guó)醫(yī)學(xué)對(duì)椎間盤退變的治療
    3. 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)椎間盤退變的研究
        3.1 流行病學(xué)
        3.2 病因及發(fā)病機(jī)制
        3.3 現(xiàn)代治療進(jìn)展
    4. CXCR4、NF-κB與椎間盤退變的關(guān)系
    5. 脊伸痹通方的組方特點(diǎn)及治療經(jīng)驗(yàn)
第2章 實(shí)驗(yàn)研究
    1. 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的制備及鑒定
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料和方法
        1.2 實(shí)驗(yàn)步驟
        1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1.4 討論
    2. 經(jīng)皮穿刺大鼠尾椎間盤退變模型的建立
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料和方法
        2.2 實(shí)驗(yàn)步驟
        2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4 討論
    3. 脊伸痹通方聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)退變椎間盤修復(fù)的影響
        3.1 實(shí)驗(yàn)材料和方法
        3.2 實(shí)驗(yàn)步驟
        3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4 討論
    4. 脊伸痹通方聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)椎間盤、血清CXCR4、NF-κB表達(dá)的影響
        4.1 實(shí)驗(yàn)材料和方法
        4.2 實(shí)驗(yàn)步驟
        4.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        4.4 討論
第3章 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的學(xué)術(shù)成果
致謝

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