目的:通過(guò)研究上調(diào)骨肉瘤細(xì)胞株MG-63中的mi RNA34a表達(dá)水平,探究其對(duì)下游的靶基因-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1基因(DNMT1)及其骨肉瘤細(xì)胞凋亡和增殖的影響,為骨肉瘤生物學(xué)基因靶向治療開(kāi)辟新思路和奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:實(shí)驗(yàn)分為三組:A組:空白組(未處理組);B組:陰性對(duì)照組(轉(zhuǎn)染陰性質(zhì)粒);C組:實(shí)驗(yàn)組(轉(zhuǎn)染組)。利用慢病毒構(gòu)建能夠穩(wěn)定表達(dá)mi RNA34a的轉(zhuǎn)染質(zhì)粒:pc DNA3.1/pri-mi RNA34a,成功轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)組骨肉瘤細(xì)胞株,培養(yǎng)生長(zhǎng)良好并能穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株。同樣,利用慢病毒陰性質(zhì)粒(pc DNA3.1)處理陰性對(duì)照組。空白組細(xì)胞株不予以處理。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR,檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后三組細(xì)胞中DNMT1m RNA變化情況。Western Blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后三組細(xì)胞蛋白表達(dá)水平的變化。利用流式細(xì)胞術(shù)法對(duì)細(xì)胞周期變化、細(xì)胞增殖以及細(xì)胞凋亡情況進(jìn)行檢測(cè)并分析。結(jié)果:轉(zhuǎn)染滿意后,對(duì)三組細(xì)胞株的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)分析。在實(shí)驗(yàn)組中的DNMT1 m RNA相對(duì)表達(dá)水平(0.26±0.04)顯著低于陰性對(duì)照組(1.02±0.15)和空白對(duì)照組(1.05±0.06),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);實(shí)驗(yàn)組中的DNMT1蛋白表達(dá)量較對(duì)照組明顯下降(P0.05);骨肉瘤細(xì)胞的增殖受到抑制,實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染后第5天增殖抑制率達(dá)28.2±1.69%;實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞在G0/G1期的細(xì)胞比率高達(dá)71.58±0.96%,顯著高于空白對(duì)照組(62.99±0.67%)和陰性對(duì)照組(63.54±1.33%)(P0.05);細(xì)胞凋亡明顯增強(qiáng),實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的凋亡率為28.20%,顯著高于空白對(duì)照組(5.06%)和陰性對(duì)照組(5.34%)的細(xì)胞凋亡率(P0.05)。結(jié)論:骨肉瘤MG-63細(xì)胞株轉(zhuǎn)染pc DNA3.1/pri-mi RNA34a質(zhì)粒后,增強(qiáng)了mi RNA34a的表達(dá),降低了下游DNMT1基因m RNA及蛋白的表達(dá)水平,促進(jìn)了骨肉瘤細(xì)胞凋亡,對(duì)骨肉瘤細(xì)胞的增殖產(chǎn)生了抑制作用。mi RNA34a為骨肉瘤在分子生物學(xué)領(lǐng)域的基因靶向診療開(kāi)辟了新思路。
【學(xué)位單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R738.1
【文章目錄】：
摘要
abstract
前言
材料與方法
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
討論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄
個(gè)人簡(jiǎn)歷
開(kāi)題、中期及學(xué)位論文答辯委員組成

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 宋亮;劉慶春;鐘志凱;劉德傳;;骨肉瘤基因治療及載體系統(tǒng)研究現(xiàn)狀[J];臨床軍醫(yī)雜志;2008年04期

本文編號(hào)：2847040