【摘要】：組織工程學(xué)的出現(xiàn)為組織損傷或機體創(chuàng)傷提供了一種組織再生的技術(shù)手段,將改變外科傳統(tǒng)的“以創(chuàng)傷修復(fù)創(chuàng)傷”的治療模式,從而使臨床對損傷的治療邁入無創(chuàng)修復(fù)的新階段。對于組織工程組織的構(gòu)建,目前最為重要的細胞是骨髓基質(zhì)干細胞(BMSCs)和內(nèi)皮細胞(EC)。BMSCs作為最廣泛使用的種子細胞提供了組織構(gòu)建的始動因素,體外培養(yǎng)帶有細胞活性的生物材料并移植入體內(nèi),使得修復(fù)復(fù)雜創(chuàng)傷成為可能,同時內(nèi)皮細胞作為組織工程血管化的承擔(dān)者和執(zhí)行者,如何快速激活靜止的內(nèi)皮細胞,及早完成植入體內(nèi)組織的血管化階段,對組織工程來說具有十分重要的意義。研究發(fā)現(xiàn)BMSCs發(fā)揮修復(fù)損傷的器官和組織的治療作用是通過多靶點和多重作用機制。BMSCs能夠分泌多種旁分泌因子,包括細胞因子、趨化因子以及營養(yǎng)因子等作用于不同細胞,發(fā)揮不同的調(diào)節(jié)作用。BMSCs復(fù)合材料移植入體內(nèi)后,引起血管的長入,從而加速創(chuàng)傷的修復(fù)進程。然而目前尚缺乏其機制方面的研究。BMSCs能否能夠通過旁分泌作用分泌某些因子作用于EC,以及通過什么樣的途徑調(diào)節(jié)EC進而促進其血管生成能力增加。這方面的探索對組織工程血管化有重要的價值。本研究第一部分利用BMSCs和RAOEC兩種細胞,采用間接共培養(yǎng)體系模擬兩種細胞的相互作用,并進一步探究BMSCs的旁分泌作用對EC產(chǎn)生的生物學(xué)影響,同時對共培養(yǎng)產(chǎn)生的細胞上清液中外泌體進行TMT蛋白定量檢測,為后續(xù)的機制研究指明方向,結(jié)果顯示BMSCs能夠?qū)AOEC的增殖、凋亡、遷移、侵襲和成血管能力產(chǎn)生影響,并且外泌體生物信息學(xué)結(jié)果初步表明了BMSCs能夠影響RAOEC與細胞外基質(zhì)結(jié)合、粘附以及細胞內(nèi)的信號通路的轉(zhuǎn)導(dǎo),篩選出的差異蛋白也為下一步的研究提供了基礎(chǔ)。本課題組致力于骨組織工程的研究,通過構(gòu)建骨缺損動物模型,在特定的觀察時間段內(nèi),觀察骨缺損的修復(fù)效果。在基礎(chǔ)研究中多數(shù)實驗研究對骨缺損的修復(fù)效果評估仍停留在組織學(xué)評估階段,如HE染色、免疫組化和影像學(xué)等,反映的是骨損傷后修復(fù)過程中無機鹽及膠原成分的累積程度。骨骼具有重要的生理功能,如運動、負重和保護內(nèi)臟等,均與骨的力學(xué)性質(zhì)密切相關(guān),尤其對于長段骨來說。因此骨的質(zhì)量和性能的恢復(fù)程度必須以骨的生物力學(xué)功能的恢復(fù)為標(biāo)準(zhǔn)。在基礎(chǔ)研究中,EGFP轉(zhuǎn)基因大鼠常被用作動物模型的構(gòu)建、種子細胞的提取和報告基因的示蹤等,然而作為一種動物模型,其骨缺損修復(fù)的能力尚未見報道。本研究第二部分通過制備野生型SD大鼠和轉(zhuǎn)基因EGFP大鼠的股骨鉆孔模型,利用系統(tǒng)性生物力學(xué)評價手段,對兩組大鼠在不同恢復(fù)階段的骨缺損修復(fù)效果進行比較,發(fā)現(xiàn)組織結(jié)構(gòu)再生與功能再生評價分別在不同層面方面反應(yīng)骨損傷修復(fù)的效果,真實反映出大鼠股骨孔性缺損在修復(fù)過程中組織再生和力學(xué)再生的特點,并且觀察到生物力學(xué)功能評價能夠較組織結(jié)構(gòu)評價更敏感的發(fā)現(xiàn)兩組對照組之間差異,豐富了對骨損傷修復(fù)評價的基礎(chǔ)研究。
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R68
【圖文】：

[28]。體內(nèi)不同組織的不同細胞具有分圖1 圖中顯示外泌體的形成是由內(nèi)泌體融合形成MVB，成熟之后與細胞膜融合，將外泌體釋放到細胞外，從而作用與靶細胞產(chǎn)生信號傳遞的作用

我們采用了 BMSCs 和 RAOEC兩種細胞形成的間接共培養(yǎng)體系（圖2），上層 A 接種 BMSCs，下層 B 接種RAOEC 。 圖 示 的 半 透 膜 的 孔 徑 為0.4μm，細胞不能透過此半透膜，粒徑在 0.4μm 以下的蛋白質(zhì)等小分子物質(zhì)可以自由穿過，在膜的上下兩層中氧氣、CO2和營養(yǎng)物質(zhì)等可以自由交換。1) 細胞準(zhǔn)備：濃度為 2×103/ml 的 P3 代 BMSCs，濃度為 1.5×103/ml 的 P5 代 RAOEC2) 實驗分組：分為兩組，分別為共培養(yǎng)實驗組（Co-culture group）和單獨培養(yǎng)對照組（Control group）。其中共培養(yǎng)實驗組的小室內(nèi)接種 BMSCs，六孔板內(nèi)接種RAOEC

基質(zhì)膠管腔形成實驗：a) 將購得的基質(zhì)膠（Matrigel）放在冰水浴中過夜融化；b) 實驗所用的槍頭、EP 管、96 孔板在實驗前半小時置于-20℃預(yù)冷c) 取融化的基質(zhì)膠（Matrigel）加入到 96 孔板，在設(shè)計好的孔里每孔加量不要有氣泡，注意此步驟在冰上操作；d) 培養(yǎng)箱放置 30min，使基質(zhì)膠（Matrigel）凝固；e) 收集兩組經(jīng)過 7 天培養(yǎng)后的 RAOEC，重懸并進行定量，細胞2.5×105/ml；f) 取上述定量后的細胞，每孔加 100μl 細胞懸液；g) 放置于培養(yǎng)箱中孵育 6h，在倒置顯微鏡下觀察并記錄拍照。注意：避免細胞濃度過大或過小，使成血管效果不明顯；注意基質(zhì)膠的特種細胞前，所有步驟都在冰上進行。) 體內(nèi)基質(zhì)膠塞實驗（In vivo Materigel Plug Angiogenesis Assay）：

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 楊國宏;張春軍;趙富生;崔榮軍;李月珍;董建將;劉志新;孫曉冬;;骨髓基質(zhì)干細胞的研究進展[J];解剖科學(xué)進展;2015年04期

2 劉效波;張海寧;趙曉華;;bFGF基因體外轉(zhuǎn)染缺血性心肌病患者骨髓基質(zhì)干細胞研究[J];醫(yī)學(xué)信息(中旬刊);2010年09期

3 胡孝麗;陳士龍;羅志曉;冷衛(wèi)東;;骨髓基質(zhì)干細胞在口腔頜面組織修復(fù)中的研究進展[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2009年05期

4 李輝映;文益民;陳克明;藍旭;汪大彬;孫振剛;胡凌云;;多次移植骨髓基質(zhì)干細胞有利于脊髓損傷修復(fù)[J];中國矯形外科雜志;2009年22期

5 鄭涵;瞿玉興;;骨髓基質(zhì)干細胞修復(fù)骨不連與骨缺損的進展[J];基層醫(yī)學(xué)論壇;2008年16期

6 吳志明;王東;栗樹偉;;骨髓基質(zhì)干細胞成骨的研究進展[J];實用骨科雜志;2007年08期

7 陸長青;王勇;陳登榜;郭瓊;冉黎;王凡;;丹參誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)干細胞向神經(jīng)元樣細胞分化及相關(guān)基因的表達[J];四川解剖學(xué)雜志;2006年01期

8 吳朝陽;林建華;王長;許衛(wèi)紅;陳雷;;不同來源人骨髓基質(zhì)干細胞的生物學(xué)特性研究[J];華中醫(yī)學(xué)雜志;2006年03期

9 陳江;楊進;閆福華;趙欣;;非誘導(dǎo)條件下犬骨髓基質(zhì)干細胞的生物特性(英文)[J];中國臨床康復(fù);2005年46期

10 武曉靜,黃嵐,周騏,宋耀明,周音頻,崔斌;人骨髓基質(zhì)干細胞的分子表型特征及微環(huán)境依賴向內(nèi)皮分化的能力[J];心肺血管病雜志;2005年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 林竟韌;郭坤元;嚴定安;李江琪;;克隆的人骨髓基質(zhì)干細胞功能研究[A];第九屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要匯編[C];2003年

2 童培建;何幫劍;金紅婷;趙紅昌;沈彥;肖魯偉;馬鎮(zhèn)川;;骨髓基質(zhì)干細胞在骨內(nèi)的示蹤方法研究[A];2008年浙江省骨科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年

3 季正劍;許小媛;楊麗華;邢華;;大鼠骨髓基質(zhì)干細胞的分離與培養(yǎng)[A];全國動物生理生化第十一次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2010年

4 張林樸;;人胚骨髓基質(zhì)干細胞向成骨細胞誘導(dǎo)分化及生物學(xué)特性檢測[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會2006年學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2006年

5 魏秋實;鄧偉民;孫偉珊;;不同途徑攝取糖皮質(zhì)激素大鼠骨髓基質(zhì)干細胞生物活性研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

6 魏秋實;鄧偉民;;不同途徑攝取糖皮質(zhì)激素大鼠骨髓基質(zhì)干細胞生物活性研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第五次中青年骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2013年

7 孫曉寧;趙強;徐得民;陳安清;翟萬銀;常江;;骨髓基質(zhì)干細胞構(gòu)建組織工程心臟瓣膜的可行性研究[A];第八屆華東六省一市胸心血管外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

8 張保衛(wèi);李靜;張富強;商慶新;曹誼林;;體外培養(yǎng)人骨髓基質(zhì)干細胞誘導(dǎo)為成骨細胞的超微結(jié)構(gòu)變化[A];2004年上海市口腔醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2004年

9 孫曉寧;趙強;徐得民;陳安清;翟萬銀;常江;;骨髓基質(zhì)干細胞構(gòu)建組織工程心臟瓣膜的可行性研究[A];全國心臟瓣膜外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2005年

10 呂玉明;程立明;裴國獻;蔡哲;舒峻;張可華;郭麗麗;俞慶聲;;犬骨髓基質(zhì)干細胞向成骨細胞誘導(dǎo)分化的實驗研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第10屆全國顯微外科學(xué)術(shù)會議暨世界首例斷肢再植成功50周年慶典論文集[C];2013年

相關(guān)重要報紙文章 前4條

1 ;地塞米松對骨髓基質(zhì)干細胞生物學(xué)特性的影響[N];中國醫(yī)藥報;2003年

2 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 耿碩 整理 衣曉峰 馮宇曦;衰老致骨質(zhì)疏松原因有新解[N];健康報;2012年

3 衣曉峰 馮宇曦;衰老為何會致骨質(zhì)疏松[N];中國醫(yī)藥報;2012年

4 祝天澤;曹誼林“再造顱骨”轟動世界[N];大眾科技報;2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 齊奇;組蛋白去甲基化酶KDM4A調(diào)控骨髓基質(zhì)干細胞成脂/成骨分化的作用和機制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2018年

2 崔大平;骨髓基質(zhì)干細胞治療股骨頭壞死實驗與臨床研究[D];大連理工大學(xué);2017年

3 林競韌;人骨髓基質(zhì)干細胞克隆的培養(yǎng)及其造血支持作用的實驗研究[D];中國人民解放軍第一軍醫(yī)大學(xué);2003年

4 陳金武;骨髓基質(zhì)干細胞向軟骨細胞分化的實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

5 劉戟;人21.5kDa MBP基因?qū)ι窠?jīng)及相關(guān)細胞增殖與凋亡作用的研究[D];四川大學(xué);2004年

6 滕勇;人骨髓基質(zhì)干細胞永生化及相關(guān)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

7 陳紅霞;大鼠骨髓基質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化和自體移植治療心肌梗死的實驗研究[D];山東大學(xué);2004年

8 吳惺;hTRAIL基因修飾成人骨髓基質(zhì)干細胞靶向腦膠質(zhì)瘤基因治療的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

9 王凡;NGF、BDNF基因轉(zhuǎn)染大鼠骨髓基質(zhì)干細胞后的表達和誘導(dǎo)分化以及對神經(jīng)膠質(zhì)細胞保護作用的實驗研究[D];四川大學(xué);2004年

10 高亮;骨髓基質(zhì)干細胞向神經(jīng)細胞誘導(dǎo)分化及體內(nèi)移植治療腦缺血的實驗研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 石思潮;監(jiān)測骨髓基質(zhì)干細胞胃癌作用機制的微環(huán)諧振器研究[D];華中科技大學(xué);2017年

2 曹留霞;NF-κB和Ubc9在骨髓基質(zhì)干細胞向肝細胞分化中的表達[D];青島大學(xué);2014年

3 曹天慶;骨髓基質(zhì)干細胞促內(nèi)皮細胞遷移和成血管作用及系統(tǒng)性生物力學(xué)評價骨缺損的力學(xué)功能再生的研究[D];中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué);2018年

4 陳得勝;富血小板血漿誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)干細胞聯(lián)合軟骨支架治療兔激素性股骨頭壞死[D];成都醫(yī)學(xué)院;2017年

5 王益民;絲素蛋白結(jié)合骨髓基質(zhì)干細胞誘導(dǎo)的成骨細胞修復(fù)骨缺損的實驗研究[D];蘇州大學(xué);2006年

6 許艷彬;大鼠頜骨與髂骨來源骨髓基質(zhì)干細胞體外生物學(xué)特性的比較研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2008年

7 汪國棟;血管內(nèi)皮生長因子轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細胞復(fù)合支架治療犬月骨缺血壞死[D];華中科技大學(xué);2011年

8 解大龍;脫細胞半月板支架與骨髓基質(zhì)干細胞聯(lián)合培養(yǎng)的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2006年

9 王瀛;HIF-1α慢病毒載體的構(gòu)建及其在骨髓基質(zhì)干細胞內(nèi)表達的檢測[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2012年

10 程永慶;人骨髓基質(zhì)干細胞體外構(gòu)建組織工程心臟瓣膜的實驗研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

本文編號：2802054