微孔化燒傷變性真皮聯(lián)合脂肪干細(xì)胞構(gòu)建人工復(fù)合皮的初步研究

發(fā)布時(shí)間：2020-08-17 11:08

【摘要】：目的:利用脂肪干細(xì)胞(adipose-derived stem cells ADSCs)在體外聯(lián)合激光微孔化燒傷變性真皮基質(zhì)(laser micropore denatured dermal matrix LP-DDM)構(gòu)建人工復(fù)合皮,通過觀察和分析其生物相容性及移植后血管化等效果,以期獲得一種新型復(fù)合皮。方法:1、取健康雄性SD大鼠腎周脂肪,體外分離培養(yǎng)ADSCs并進(jìn)行成脂、成骨分化實(shí)驗(yàn),對ADSCs表面標(biāo)記物CD29、CD45、CD90進(jìn)行流式細(xì)胞檢測;切取SD大鼠背部深Ⅱ度燒傷創(chuàng)面處全厚皮并進(jìn)行脫細(xì)胞和激光微孔處理得到LP-DDM;將ADSCs種植于LP-DDM上觀察細(xì)胞的種植情況并構(gòu)建成人工復(fù)合皮;2、取16只雄性健康SD大鼠,隨機(jī)分為4組,分別設(shè)為A組:移植DDM、B組:移植DDM+ADSCs、C組:移植LP-DDM、D組:移植LP-DDM+ADSCs,每只大鼠背部設(shè)計(jì)1個(gè)大小約2cmí2cm的皮瓣,按照分組將材料包埋植入皮下并縫合皮膚,每組分別在包埋移植術(shù)后第7天、14天、21天、28天時(shí)大體觀察移植皮片與周圍組織的相容性及血管化情況,并取組織進(jìn)行HE染色觀察其變化。結(jié)果:1、原代培養(yǎng)的ADSCs呈星型或多角形,傳代后的ADSCs呈現(xiàn)長梭形,成纖維細(xì)胞樣、漩渦樣生長。ADSCs成脂誘導(dǎo)分化4周后觀察到油紅O染色后大而圓狀脂滴,ADSCs成骨誘導(dǎo)分化4周后觀察茜素紅染色后的鈣沉淀;流式細(xì)胞儀檢測ADSCs表面標(biāo)記物結(jié)果示CD45陰性表達(dá)(0.70%)的同時(shí)CD29、CD90陽性表達(dá)率為93.4%。ADSCs與LP-DDM共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)ADSCs可順利接種并生長于LP-DDM上,DAPI熒光染色后通過熒光顯微鏡觀察到定植于支架材料上的ADSCs呈現(xiàn)藍(lán)色熒光,并且細(xì)胞增長速率與對照組相比無明顯差異(P0.05),另外通過CCK-8標(biāo)記后測定OD值,LP-DDM組和DDM組與對照組比較無明顯差異(P0.05),表明LP-DDM、DDM并不會(huì)造成細(xì)胞毒性作用,且細(xì)胞增殖復(fù)制能力強(qiáng),細(xì)胞活力好。2、動(dòng)物實(shí)驗(yàn):(1)大體觀察:移植術(shù)后14天可見A、B、C、D四組少量紅色血管組織出現(xiàn)在皮片周圍;移植術(shù)后28天,肉眼見D組皮片周圍形成較多紅色血管樣組織,較其他3組更為密集,并且與皮下周圍組織緊密融合,部分皮片顏色由乳黃色逐漸變?yōu)榉奂t色,并在植入皮片的表面可見散在的小紅點(diǎn)。(2)組織學(xué)觀察(HE染色):第14天見C、D組皮片周圍均出現(xiàn)少量血管浸潤現(xiàn)象,A組血管浸潤少,4組皮片周邊均可見炎性細(xì)胞存在。第28天,A組中少量血管浸潤,與正常組織相接的邊界清晰,B組可見少量血管浸潤現(xiàn)象,伴有脂肪樣結(jié)締組織,C組見有較多血管浸潤,D組可見復(fù)合皮邊界與內(nèi)部均出現(xiàn)大量血管浸潤,并伴有脂肪樣結(jié)締組織生成,鏡下見炎癥細(xì)胞逐漸減少,其邊界基本與正常組織相融合。結(jié)論:新型人工復(fù)合皮移植后發(fā)現(xiàn)其生物相容性好,未出現(xiàn)明顯的免疫排斥反應(yīng),具有加速組織血管化、向脂肪樣組織分化的作用,為今后此種復(fù)合皮在創(chuàng)面愈合方面的相關(guān)研究以及臨床應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R644
【圖文】：

倒置顯微鏡,附圖