【摘要】：目的:炎癥反應(yīng)引起的繼發(fā)性損傷可加重創(chuàng)傷性腦損傷(Traumatic brain injury,TBI)后神經(jīng)元的死亡。G蛋白偶聯(lián)雌激素受體(G-protein coupled estrogen receptor,GPER)具有神經(jīng)保護作用,激活GPER可以減少神經(jīng)元的凋亡,但對小膠質(zhì)細胞功能的影響目前尚不清楚。本研究擬檢測GPER激動劑G1對不同性別TBI大鼠損傷周圍區(qū)小膠質(zhì)細胞活化狀態(tài)的影響,探討不同雌激素水平條件下G1對神經(jīng)炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用及其信號機制。方法:SD雄性大鼠、雌性大鼠和去卵巢雌性(OVX)大鼠采用Feeney's自由落體法建立中度創(chuàng)傷性腦損傷模型,假手術(shù)組僅去骨瓣。術(shù)前30分鐘對側(cè)側(cè)腦室注射G1或者等量體積的溶劑。檢測指標(biāo)主要包括M1型小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞標(biāo)志物 IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS、CD32),M2 型標(biāo)志物(IL-1、Arg1、CD206)。(1)在損傷后6小時、1天、3天ELISA法檢測炎癥因子IL-1β、IL-6、TTF-α和IL-10的變化,western blot檢測iNOS、Arg1、CD206、C、32變化,分析腦損傷后的炎癥反應(yīng)是否具有性別差異;(2)G1處理組大鼠,損傷后1d檢測炎癥因子表達的變化,損傷后3天免疫熒光檢測小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞的極化情況,分析G1對炎癥反應(yīng)的作用是否具有性別差異;(3)western blot檢測不同性別大鼠GPER的基礎(chǔ)表達及損傷后的表達變化,比較OVX大鼠在補充雌激素前后GPER及炎癥因子表達的變化,進一步闡明不同雌激素水平對G1調(diào)節(jié)炎癥作用的影響;(4)western blot檢測損傷后Akt、ERK磷酸化的變化,初步闡明G1調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的機制。結(jié)果:1.TBI大鼠損傷周圍區(qū)小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)無性別差異:雄性、正常雌性、去卵巢雌性大鼠腦組織IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10基礎(chǔ)表達無差異;損傷后炎癥因子(IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10)、Arg1/iNOS均增加,但下降較快,表面標(biāo)志物CD32、CD206增高持續(xù)至第3天。2.G1抑制雄性和去卵巢雌性大鼠損傷后炎癥因子表達,升高Arg1/iNOS,增加Iba1+CD206+細胞,減少Iba1+CD32+細胞;G1增加正常雌性大鼠損傷后炎癥因子表達,降低Arg1/iNOS,減少Iba1+CD206+細胞,表明G1在雄性和去卵巢雌性TBI大鼠中發(fā)揮抗炎作用,在正常雌性TBI大鼠中起促炎作用。3.正常雌性大鼠GPER基礎(chǔ)表達水平高于雄性和去卵巢雌性大鼠,損傷后雄性和去卵巢雌性大鼠GPER表達一過性增加,正常雌性大鼠GPER表達不增加;補充雌激素后,去卵巢雌性大鼠GPER表達增高,且G1促炎作用消失。4.TBI大鼠損傷后p-Akt減少、p-ERK增加;在雄性和去卵巢雌性大鼠中,G1處理后p-Akt增加,p-ERK減少,雌性大鼠G1處理后p-Akt、p-ERK無明顯變化。結(jié)論:1.G1對TBI大鼠小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞極化的作用具有性別差異;2.G1調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的性別差異與不同雌激素水平下GPER表達差異有關(guān);3.AKT和ERK信號通路可能參與G1對炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)。
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R651.15
【圖文】：

現(xiàn)出相似的變化：腦損傷后第１天，促炎因子ＩＬ－ｌｐ、ＩＬ－６、ＴＮＦ－ｏｕ抗炎因子逡逑ＩＬ－１０均明顯增高，腦損傷后第３天ＩＬ－ｌｐ仍高于假手術(shù)組，但ＩＬ－６、ＴＮＦ－ｃｔ、ＩＬ－１０逡逑與假手術(shù)組無差異（圖１）。這些結(jié)果提示：ＴＢＩ后炎癥因子表達很快增加，但逡逑這種變化不具有性別差異，不受雌激素水平高低的影響。逡逑ｓｈａｍ邋Ｉｄ邋３ｄ逡逑□邋Ｈ邋■逡逑＊逡逑３００邋＂１邋Ｉ邋＊邐ｉ邐２００邐＊＊逡逑ｌ邋．邋１邐ｆ邋ｉ邐１．５０－邐１邐＾邐ｉ逡逑ｆ：：［ｌＬｊｌＪｉ邋ｌ：ｌｎｌｌ邋ｎｉｌ邋Ｊｉ逡逑ｍａｌｅ邐ｆｅｍｌａｅ邐ＯＶＸ邐ｍａｌｅ邐ｆｅｍａｌｅ邐ＯＶＸ逡逑＾邋９０１邋＾邐６００邐１邐＊邐ｒ＂７逡逑＾ｉｌｉｌｉＡ邋�。海荩�，ｌｌ邋ｌｌ邋ｌｉ逡逑ｍａｌｅ邐ｆｅｍａｌｅ邐ＯＶＸ邐ｍａｌｅ邐ｆｅｍａＪｅ邐ＯＶＸ逡逑圖１邋ＴＢＩ大鼠損傷周圍區(qū)腦組織炎癥因子的動態(tài)變化（＊ｐ＜０．０５，邋＊＊／？＜０．０１）逡逑１５逡逑

顯著升高（ｍａｌｅ組６ｈ開始升高），且持續(xù)升高至第３天；腦損傷后Ａｒｇｌ表達增逡逑加早于ｉＮＯＳ，在ＴＢＩ后６ｈ即升高，持續(xù)至第１天，但３天時表達下降，降至基逡逑礎(chǔ)水平（ＯＶＸ組仍高于基礎(chǔ)水平）（圖２Ａ和２Ｂ）。Ａｒｇｌ／ｉＮＯＳ比值分析結(jié)果顯逡逑示：損傷后６小時Ａｒｇｌ／ｉＮＯＳ增高，損傷后第１天降至基礎(chǔ)水平，損傷后第３逡逑天比值顯著降低（圖２Ｃ）。Ａｒｇｌ／ｉＮＯＳ增高提示ＮＯ合成減少，Ａｒｇｌ／ｉＮＯＳ降低逡逑提示ＮＯ合成增加，因此腦損傷第１天時腦組織ＮＯ合成減少，第３天ＮＯ合成逡逑增加。研宄結(jié)果顯示：ＴＢＩ后Ａｒｇｌ表達增加早于ｉＮＯＳ，Ａｒｇｌ／ｉＮＯＳ先升高后降逡逑低，這些變化不具有明顯的性別差異，不同雌激素水平對這些指標(biāo)也無明顯影響。逡逑ｍａｌｅ邐ｆｅｍａｌｅ邐ＯＶＸ逡逑Ａ逡逑ｉＮＯＳ邐ｗｍｍ邋ｍｍｍ邋－邐ｍｍｍ邋ｍｍ邋＾邋ｍｍｍ邋ｍｍ邋ｍｍｍ逡逑１邐＇？ＰＷｉｉｉＰ＇邐ｔＭｘａｗｗＭ＊＇＇邐ＶＨＭＨＰ逡逑ＧＡＰＤＨ邋ｍｍｍ邋ｍｍ邋ｍｍｍ邋ｍｍｍ邋ｍｍｍ邋ｍｍｍ邋ｍｍ邐ｍｍｍ邋ｍｍｍ邋ｍｍｍ＇逡逑ｓｈａｍ５Ｉｉ邋ｉｄ邋３ｄ￣邋ｓｈａｍ邋６ｈ邋Ｔ３邋Ｍ邋ｓＨａｍ５Ｈ邋Ｔ３邋５３￣逡逑Ｂ邋＝４－｜邐＾３－ｊ邐Ｍｉ逡逑ｍａｌｅ邐ｆｅｍａｌｅ邐ＯＶＸ邐ｍａｌｅ邋ｆｅｍａｌｅ邋ＯＶＸ逡逑ｍａｌｅ邐ｆｅｍａｌｅ邐ＯＶＸ逡逑圖２邋ＴＢＩ大鼠損傷周圍區(qū)腦組織ｉＮＯＳ和Ａｒｇｌ的表達變化。Ａ：Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ檢逡逑測損傷周圍區(qū)ｉＮＯＳ和Ａｒｇｌ蛋白，Ｂ：ｉＮＯＳ和Ａｒｇｌ相對表達量的分析，逡逑Ｃ：邋ｉＮＯＳ／Ａｒｇｌ邋的比值分析。（＊ｐ＜０．０５

圖３邋ＴＢＩ大鼠ＴＢ丨損傷周圍區(qū)腦組織ＣＤ３２和ＣＤ２０６表達變化。Ａ：Ｗｅｓｔｅｍ邋ｂｌｏｔ逡逑檢測損傷周圍區(qū)皮層ＣＤ２０６和ＣＤ３２蛋白，Ｂ：邋ＣＤ２０６和ＣＤ３２定量分析平逡逑（＊ｐ＜０．０５，邋＊＊ｐ＜０．０＼）逡逑

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 宋歌;呂月濤;狄林林;宗文納;陳伯旺;;早期腸內(nèi)營養(yǎng)對重癥肺炎大鼠免疫功能的影響分析[J];中國醫(yī)學(xué)前沿雜志(電子版);2017年01期

2 葉敏;陳達柔;陳宇中;杜少冰;杜展鑫;李玉鳳;唐s鉈

本文編號：2775976