【摘要】：目的:血管腔內(nèi)治療技術以其微創(chuàng)的獨特優(yōu)勢成為目前治療動脈閉塞性疾病的主要治療方式之一,然而腔內(nèi)介入治療術后血管再狹窄是一直不可回避的問題。本課題組擬采用核轉(zhuǎn)染細胞過表達Periostin蛋白和體內(nèi)細胞移植干預的方式對頸動脈損傷模型小鼠進行治療并檢測評估其效果,致力于尋找更好的腔內(nèi)介入治療術后血管再狹窄的治療方案。方法:特制高脂飼料喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠四個月,在飼養(yǎng)前后對小鼠進行稱重和檢測血脂水平,處死部分小鼠并進行頸總動脈和肝臟HE染色,觀察組織結(jié)構的變化。外購穩(wěn)定過表達Periostin蛋白內(nèi)皮前體細胞(endothelial progenitor cells,EPCs)細胞株并進行培養(yǎng)。將過表達Periostin蛋白的EPCs、沉默表達Periostin蛋白的EPCs、正常的EPCs分別經(jīng)尾靜脈注射進小鼠體內(nèi)。治療四個月后,通過Evans blue染色檢測損傷頸動脈再內(nèi)皮化情況;HE和紅油O染色檢測損傷動脈新生內(nèi)膜增生情況并比較斑塊面積大小;免疫組織化學染色法測定細胞核抗原Ki67和PCNA表達,間接檢測細胞增殖程度。結(jié)果:高脂飲食組小鼠體重增加;血脂水平明顯升高;病理染色提示頸總動脈內(nèi)膜破壞增厚,大量斑塊形成;肝臟結(jié)構紊亂,大部分肝細胞腫脹、氣球樣變,內(nèi)有空泡形成。以上結(jié)果提示ApoE-/-小鼠頸動脈損傷模型建立成功。觀察細胞的形態(tài)呈鋪路石樣;免疫組化鑒定細胞CD34表達為陽性;Western-blot實驗檢測Periostin蛋白在EPCs的穩(wěn)定表達,可以用于后期頸動脈損傷模型小鼠的體內(nèi)移植治療。各病理染色結(jié)果表明過表達Periostin蛋白能夠促進EPCs在小鼠體內(nèi)增殖和損傷頸動脈再內(nèi)皮化,效果明顯。結(jié)論:本課題通過高脂飼料喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠,能夠成功建立頸動脈損傷模型小鼠。通過基因轉(zhuǎn)染的方法構建過表達Periostin蛋白的EPCs,并進行體內(nèi)移植治療,研究結(jié)果表明過表達Periostin蛋白的EPCs能促進小鼠損傷頸動脈再內(nèi)皮化,效果優(yōu)于沉默表達Periostin蛋白的EPCs和單純EPCs。
【學位授予單位】：蚌埠醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R654
【圖文】：

圖 1-1 高脂飼養(yǎng)對小鼠體重的影響脂變化別在飼養(yǎng)前和每個月定期采集小鼠靜脈血，檢測總膽固醇（TCG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（H

圖 1-2 高脂飲食前、后對各組小鼠各項血脂水平影響注：圖 A、B、C、D 分別為 HDL-C、LDL-C、TC、TG 指標隨著時間變化而變化的水平。1.3.4 小鼠肝臟及頸動脈取材照片

圖 1-3 小鼠肝臟和頸總動脈及主動脈樹取材注：圖 A 和 B、C、D 分別為對照組和高脂飲食組小鼠肝臟和頸動脈取材過程片1.3.4 頸總動脈和肝臟染色分別在四個月后取高脂組和對照組小鼠頸總動脈和肝臟前葉，進行HE染色圖 1-4 提示：對照組(A)小鼠頸動脈各層次結(jié)構完整、清晰，血管內(nèi)膜薄、平滑無脂質(zhì)沉積和血管平滑肌細胞增生。高脂飲食組（B）小鼠頸動脈內(nèi)皮細胞被壞，內(nèi)膜增厚、形成大量纖維斑塊帽和粥樣斑塊。圖 1-5 是對照組和高脂組小肝臟 HE 染色切片。圖 1-5-A 顯示對照組小鼠肝組織結(jié)構正常，肝細胞排列均勻規(guī)則，大小一致。細胞核呈圓形，形狀規(guī)則；肝小葉未見炎癥細胞和纖維組織生，結(jié)構正常。圖 1-5-B 顯示高脂組小鼠肝組織，肝小葉結(jié)構模糊，大部分肝胞形態(tài)不規(guī)則，并可見肝細胞發(fā)生氣球樣變、空泡變性，內(nèi)有脂質(zhì)淤積，有些胞發(fā)生壞死。

【參考文獻】

相關期刊論文 前5條

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相關碩士學位論文 前1條

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本文編號：2774651