【摘要】：【目的】:研究內(nèi)源性甲狀旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)和Notch信號通路對骨髓間充質(zhì)干細胞向成骨細胞分化的影響,并探討其調(diào)節(jié)機制�！痉椒ā�:體內(nèi)實驗選用8周齡PTH野生型(WT,PTH+/+)和PTH基因敲除(KO,PTH-/-)小鼠作為實驗對象,分離小鼠脛骨,用免疫組化檢測成骨相關指標以及Notch信號通路受體和配體的表達。培養(yǎng)小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞并向成骨細胞誘導分化,分別在誘導后的3天、7天、10天、14天,用Western-blot方法檢測Notch信號通路受體和配體的表達;分別在誘導后的3天、7天、14天用Western-blot方法檢測成骨指標Runx2、骨鈣素(OCN)的表達。培養(yǎng)小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞并向成骨細胞誘導分化3d后,分別加入PTH、dbc AMP、蛋白激酶A(PKA)抑制劑H89,用Western-blot方法檢測Notch信號通路受體和配體以及成骨指標Runx2的表達。誘導分化7d后,檢測細胞中ALP活性�！窘Y(jié)果】:內(nèi)源性PTH缺乏引起成骨細胞骨形成障礙。免疫組化顯示,在野生型組小鼠脛骨骨小梁表面的成骨細胞數(shù)、相關成骨指標I型膠原(Col-I)以及Notch信號通路受體和配體的表達高于PTH基因敲除組。在野生型組和PTH基因敲除組小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞向成骨細胞誘導分化過程中,Notch信號通路的受體和配體以及各成骨指標上調(diào)。PTH基因敲除組中Notch信號通路配體Jagged1和受體Notch1表達明顯低于野生型組。PTH基因敲除組中各成骨相關指標Runx2、OCN蛋白表達均低于野生型組。誘導分化3d后,Western blot檢測顯示PTH基因敲除組Notch信號通路受體、配體和Runx2表達均低于野生型組;加入PTH、dbc AMP刺激后Notch信號通路受體、配體和Runx2表達上調(diào),而加入PKA抑制劑H89后相關蛋白表達被抑制。誘導7天后,PTH基因敲除組成骨細胞堿性磷酸酶(ALP)活性較WT組低,加入PTH或dbc AMP后ALP活性上調(diào),而H89能消除PTH及dbc AMP的作用�！窘Y(jié)論】:內(nèi)源性PTH通過c AMP/PKA通路提高骨髓間充質(zhì)干細胞中Notch信號通路的表達,通過Jagged1/Notch1通路,使Runx2表達增高,進而促進成骨細胞分化,增強成骨細胞功能。
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R580;R683

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