【摘要】：研究目的:據(jù)報道,褪黑激素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)可抑制某些類型腫瘤的上皮-間質轉化和癌癥干細胞的干性。然而,褪黑激素對骨肉瘤的作用及其機制尚不清楚。本研究旨在研究褪黑激素對骨肉瘤進展轉移及骨肉瘤干細胞的影響及其潛在機制。材料和方法:通過MTT實驗,劃痕實驗,Transwell小室實驗,蛋白質印跡實驗等方法檢測褪黑激素對骨肉瘤細胞侵襲和遷移的影響以及SOX9介導的信號傳導通路在其中的作用。通過腫瘤干細胞成球實驗和流式分析實驗等技術,研究褪黑激素對骨肉瘤干細胞的抑制作用。利用小鼠皮下荷瘤及尾靜脈注射等體內(nèi)模型來評估褪黑激素對骨肉瘤干細胞的干性能力及對骨肉瘤肺轉移的作用。研究結果:我們通過MTT實驗首先確定褪黑激素不影響骨肉瘤增殖的藥理最高濃度,之后通過劃痕實驗,Transwell試驗以研究褪黑激素對骨肉瘤遷移和侵襲的影響,結果發(fā)現(xiàn),實驗組和對照組相比,褪黑激素可降低骨肉瘤遷移和侵襲的能力.通過CD133+標記的流式細胞技術及腫瘤成球實驗,結果發(fā)現(xiàn)褪黑激素可抑制骨肉瘤干細胞的干性能力。同時,在褪黑激素刺激下,轉錄因子SOX9表達明顯降低。質粒轉染過表達SOX9后,再次進行劃痕實驗,Transwell遷移及侵襲實驗,CD133+標記的流式細胞技術實驗,腫瘤干細胞成球實驗,接通過發(fā)現(xiàn),SOX9過表達后的骨肉瘤細胞的轉移及腫瘤干細胞干性能力得到了增強。在siRNA敲降SOX9后,骨肉瘤細胞的轉移及干細胞干性能力被抑制。之后,對過表達SOX9的骨肉瘤細胞,予以褪黑激素刺激后,骨肉瘤的轉移能力和腫瘤干細胞的干性能力被抑制至過表達前水平。以上實驗結果褪黑激素能有效的抑制骨肉瘤細胞的轉移和腫瘤干細胞的干性能力。研究結論:研究證明褪黑激素能有效的抑制骨肉瘤細胞的遷移和侵襲的能力。此外,褪黑激素顯著抑制骨肉瘤干細胞的成球效應形成并調節(jié)骨肉瘤細胞的EMT標記。體內(nèi)小鼠模型顯示褪黑激素顯著抑制骨肉瘤的發(fā)生和轉移。SOX9是介導褪黑激素作用的關鍵轉錄因子。褪黑激素通過下調骨肉瘤中SOX9介導的信號傳導途徑來抑制癌癥干細胞。這些結果共同加深了對褪黑激素生物學功能以及抗骨肉瘤的理解,為骨肉瘤干細胞的干預提供了新的見解。
【圖文】：

褪黑激素參與骨肉瘤細胞的遷移和侵襲仍然未知。我們對ＨＯＳ和Ｕ２骨肉瘤逡逑細胞系進行ＭＴＴ測定，所述細胞系在體外用不同劑量梯度的褪黑激素刺激４８小逡逑時。如圖１．１和圖１．２所示，當褪黑激素的濃度是Ｏ．ＯｌｍＭ，邋０．０５ｍＭ，０．１ｍＭ，邋０．５ｍＭ，逡逑時，褪黑激素均未對ＨＯＳ骨肉瘤細胞或Ｕ２骨肉瘤細胞的增值產(chǎn)生影響，但當褪逡逑黑激素的濃度為ＩｍＭ或更高濃度的褪黑激素可能喪失這些骨肉瘤細胞系的增殖能逡逑力。逡逑□邋ＤＭＳＯ逡逑■邋ｍｅｌａｔｏｎｉｎ逡逑１．５－，逡逑ｎ邐＊邐＊＊逡逑ｉ１０｜｜邋］｜邋ｆｌｉ邋ｉｉ邋ｎ．邋ｉ逡逑■邋１１１逡逑圖１．１不同濃度的褪黑激素對骨肉瘤ＨＯＳ細胞增殖的作用逡逑２３逡逑

褪黑激素參與骨肉瘤細胞的遷移和侵襲仍然未知。我們對ＨＯＳ和Ｕ２骨肉瘤逡逑細胞系進行ＭＴＴ測定，所述細胞系在體外用不同劑量梯度的褪黑激素刺激４８小逡逑時。如圖１．１和圖１．２所示，當褪黑激素的濃度是Ｏ．ＯｌｍＭ，邋０．０５ｍＭ，０．１ｍＭ，邋０．５ｍＭ，逡逑時，褪黑激素均未對ＨＯＳ骨肉瘤細胞或Ｕ２骨肉瘤細胞的增值產(chǎn)生影響，但當褪逡逑黑激素的濃度為ＩｍＭ或更高濃度的褪黑激素可能喪失這些骨肉瘤細胞系的增殖能逡逑力。逡逑□邋ＤＭＳＯ逡逑■邋ｍｅｌａｔｏｎｉｎ逡逑１．５－，逡逑ｎ邐＊邐＊＊逡逑ｉ１０｜｜邋］｜邋ｆｌｉ邋ｉｉ邋ｎ．邋ｉ逡逑■邋１１１逡逑圖１．１不同濃度的褪黑激素對骨肉瘤ＨＯＳ細胞增殖的作用逡逑２３逡逑
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R738.1

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