【摘要】：目的:器官移植是目前治療器官衰竭以及終末期疾病的有效途徑,但器官移植術(shù)后的的免疫排斥反應(yīng)極大的制約著器官移植的發(fā)展。接受器官移植術(shù)后的患者因?yàn)槊庖吲懦夥磻?yīng)的存在需要長(zhǎng)時(shí)間服用免疫抑制藥物,然而現(xiàn)在各種免疫抑制藥物及制劑不但效果不理想且毒副作用明顯。此外,很多免疫抑制藥物在用于治療器官移植術(shù)后排斥反應(yīng)的同時(shí),又誘發(fā)了腫瘤和各種疑難并發(fā)癥,極大的影響患者術(shù)后的生活質(zhì)量。因此,新型理想免疫抑制劑的開(kāi)發(fā)是解決移植術(shù)后排斥反應(yīng)的急切需求。本研究首次將雷帕霉素衍生物替西羅莫司應(yīng)用于器官移植領(lǐng)域,探究替西羅莫司的免疫抑制效果及其可能產(chǎn)生的機(jī)制。方法:采用小鼠頸部套管法建立從供體小鼠BalB/C到受體小鼠C57BL/6的同種異體心臟移植模型,通過(guò)替西羅莫司灌胃給藥組與空白液灌胃給藥組來(lái)對(duì)比心臟移植物生存期的長(zhǎng)短,進(jìn)而探索替西羅莫司能否延長(zhǎng)移植物生存期。接著進(jìn)行淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)和混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)來(lái)摸索替西羅莫司是否抑制脾臟T細(xì)胞的活化增殖。進(jìn)一步通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、CD19+B細(xì)胞的比例變化來(lái)探究替西羅莫司對(duì)T、B細(xì)胞亞群改變的影響。通過(guò)ELISA實(shí)驗(yàn)以及qPCR實(shí)驗(yàn)等對(duì)相關(guān)細(xì)胞因子IL-4、IL-10、IFN-y、TGF-β的轉(zhuǎn)錄水平以及表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè),進(jìn)一步研究替西羅莫司抑制淋巴細(xì)胞免疫應(yīng)答以及延長(zhǎng)移植物生存期的機(jī)制。結(jié)果:替西羅莫司給藥組心臟移植物生存期天數(shù)較對(duì)照組明顯延長(zhǎng),且適宜濃度范圍的替西羅莫司對(duì)受體小鼠的體重?zé)o明顯影響。替西羅莫司給藥組,脾臟T淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯下降;且CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、CD19+B細(xì)胞比例有一定程度的降低;血清中供者特異性抗體IgG1、IgG2、IgM有較為明顯的較少;脾臟、淋巴結(jié)中Treg細(xì)胞的比例有較為明顯升高。替西羅莫司給藥組進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)相關(guān)細(xì)胞因子IL-4、TGF-β、Foxp3和IL-10都呈現(xiàn)出明顯升高趨勢(shì),細(xì)胞因子IFN-γ呈現(xiàn)明顯降低趨勢(shì)。在替西羅莫司停藥實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),停藥組移植物生存期天數(shù)較持續(xù)給藥組明顯縮短。結(jié)論:替西羅莫司延長(zhǎng)小鼠同種異體心臟移植的生存期,減輕移植物心臟炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度,具有良好的免疫抑制功能。替西羅莫司抑制受體小鼠的細(xì)胞免疫,并且也通過(guò)抑制IgG1、IgG2、IgM等抗體生成來(lái)抑制受體小鼠的體液免疫;同時(shí)可促進(jìn)Treg細(xì)胞的產(chǎn)生以及相關(guān)細(xì)胞因子TGF-β、Foxp3和IL-10的表達(dá)來(lái)誘導(dǎo)受體小鼠移植物達(dá)到長(zhǎng)期存活狀態(tài)。本研究首次探討了雷帕霉素衍生物替西羅莫司在小鼠同種異體心臟移植中的免疫抑制效果,為開(kāi)發(fā)既能抗腫瘤又能抗排斥的新型理想免疫抑制劑提供了可能,具有深遠(yuǎn)的臨床應(yīng)用意義。
【圖文】：

從而來(lái)研究這一問(wèn)題。首次記錄受體小鼠體重的時(shí)間為移植術(shù)后６－８小時(shí)，逡逑之后每間隔２４小時(shí)稱(chēng)量并記錄其體重；相關(guān)分組及平均體重?cái)?shù)據(jù)如表３．２示。逡逑如圖３．３ａ所示，移植術(shù)后連續(xù)給藥８天內(nèi)，中、低濃度替西羅莫司給藥組逡逑與對(duì)照組相比：小鼠平均體重變化趨勢(shì)相同，說(shuō)明中、低濃度替西羅莫司給藥不逡逑影響受體小鼠移植術(shù)后的體重；但高濃度的替西羅莫司給藥組與對(duì)照組相比，，小邐｜逡逑鼠平均體重變化趨勢(shì)存在明顯差異，說(shuō)明高濃度替西羅莫司給藥會(huì)影響小鼠體重逡逑的改變；總的來(lái)說(shuō)，適宜濃度的替西羅莫司對(duì)小鼠體重改變無(wú)影響。如圖３．３ｂ逡逑所示，適宜濃度（中濃度）替西羅莫司長(zhǎng)時(shí)間給藥直到耐受（移植物生存期達(dá)到逡逑１００天及以上），受體鼠１、２、３術(shù)后體重并不會(huì)降低且呈現(xiàn)上升趨勢(shì)最終趨于逡逑穩(wěn)定，說(shuō)明適宜濃度的替西羅莫司不影響術(shù)后小鼠的健康狀態(tài)。逡逑３１逡逑

邐８０邐１００逡逑Ｄａｙｓ邋ａｆｔｅｒ邋ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ邋（ｄ）逡逑圖３．２替西羅莫司對(duì)小鼠同種異體心臟移植生存期影響逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３．２邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ邋ｏｎ邋ｓｕｒｖｉｖａｌ邋ｏｆ邋ｍｏｕｓｅ邋ａｌｌｏｇｒａｆｔ邋ｈｅａｒｔ邋ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ逡逑３．１．３替西羅莫司對(duì)同種異體心臟移植術(shù)后小鼠健康狀態(tài)的影響逡逑不同濃度替西羅莫司給藥是否會(huì)對(duì)受體移植術(shù)后的健康狀態(tài)產(chǎn)生影響？本逡逑實(shí)驗(yàn)根據(jù)每天記錄小鼠體重變化的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析并描制小鼠體重變化曲線逡逑圖，從而來(lái)研究這一問(wèn)題。首次記錄受體小鼠體重的時(shí)間為移植術(shù)后６－８小時(shí)，逡逑之后每間隔２４小時(shí)稱(chēng)量并記錄其體重；相關(guān)分組及平均體重?cái)?shù)據(jù)如表３．２示。逡逑如圖３．３ａ所示，移植術(shù)后連續(xù)給藥８天內(nèi)，中、低濃度替西羅莫司給藥組逡逑與對(duì)照組相比：小鼠平均體重變化趨勢(shì)相同，說(shuō)明中、低濃度替西羅莫司給藥不逡逑影響受體小鼠移植術(shù)后的體重；但高濃度的替西羅莫司給藥組與對(duì)照組相比，小邐｜逡逑鼠平均體重變化趨勢(shì)存在明顯差異，說(shuō)明高濃度替西羅莫司給藥會(huì)影響小鼠體重逡逑的改變；總的來(lái)說(shuō)，適宜濃度的替西羅莫司對(duì)小鼠體重改變無(wú)影響。如圖３．３ｂ逡逑所示，適宜濃度（中濃度）替西羅莫司長(zhǎng)時(shí)間給藥直到耐受（移植物生存期達(dá)到逡逑１００天及以上）
【學(xué)位授予單位】：廈門(mén)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R617

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2675144