【摘要】：第一部分:大鼠脊髓損傷后caspase-9表達(dá)和脊髓神經(jīng)細(xì)胞凋亡相關(guān)性研究目的:研究Allen‘s法致大鼠脊髓損傷后不同時(shí)間點(diǎn)脊髓神經(jīng)細(xì)胞凋亡及caspase-9的表達(dá)及意義。方法:成年SD大鼠30只,隨機(jī)分為3組:空白組10只大鼠。假手術(shù)組10是大鼠(SD大鼠不損傷脊髓僅行椎板減壓)。手術(shù)組10只大鼠(損傷脊髓)。3組分別在處理前做CBS評(píng)分,對(duì)應(yīng)的6h、12h、24h時(shí)間點(diǎn)做CBS評(píng)分后取材,所得脊髓標(biāo)本行HE染色,TUNEL染色及免疫組化檢測(cè)caspase-9的表達(dá)。結(jié)果:3組大鼠術(shù)前CBS評(píng)分均為100分,術(shù)后手術(shù)組評(píng)分明顯降低,而假手術(shù)組與空白組基本無(wú)變化。HE染色結(jié)果顯示:手術(shù)組不同時(shí)間點(diǎn)脊髓組織的充血水腫明顯,而空白組和假手術(shù)組未見(jiàn)明顯改變。TUNEL檢測(cè)結(jié)果顯示:空白組和假手術(shù)組不同時(shí)間點(diǎn)僅有少量脊髓神經(jīng)細(xì)胞凋亡,而手術(shù)組在不同時(shí)間點(diǎn)脊髓神經(jīng)細(xì)胞凋亡與其他兩組比較明顯升高,其中12h時(shí)凋亡細(xì)胞最多。免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示:在假手術(shù)組和空白組偶見(jiàn)。手術(shù)組隨時(shí)間推移逐漸增多且在12h時(shí)達(dá)最高峰,與空白組及假手術(shù)組比較,手術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)損傷脊髓組織中Caspase-9的表達(dá)均明顯升高,(P0.05)。12h和24h手術(shù)組損傷脊髓組織中Caspase-9的表達(dá)高于6h手術(shù)組(P0.05);24h和12h手術(shù)組Caspase-9的表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),。結(jié)論:重物打擊大鼠脊髓損傷后出現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞凋亡,且此凋亡的發(fā)生可能與Caspase-9的表達(dá)有關(guān)。第二部分:大鼠脊髓損傷后鋅離子變化與caspase-9表達(dá)之間的相關(guān)性研究目的:研究Allen‘s法致大鼠脊髓損傷后不同時(shí)間點(diǎn)脊髓中的鋅離子的變化,探討鋅離子與caspase-9之間相關(guān)性。方法:成年SD大鼠72只,重量在200-250g。分為3組,空白組16只。假手術(shù)組16只(不損傷脊髓,大鼠僅行椎板減壓)。手術(shù)組40只。3組分別在處理前做CBS評(píng)分,對(duì)應(yīng)的6h、12h、24h時(shí)間點(diǎn)做CBS評(píng)分后取材,所得脊髓標(biāo)本行微量元素檢測(cè),HE、TUNEL、免疫組化檢測(cè)。。結(jié)果:3組大鼠脊髓中含有鋅離子,且濃度含量不高。空白組、假手術(shù)組與手術(shù)組相比三組鋅離子濃度有差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:大鼠脊髓損傷后,損傷段鋅離子的總體濃度與Caspase-9表達(dá)之間無(wú)關(guān)聯(lián),對(duì)于鋅離子是否參與脊髓細(xì)胞凋亡還需經(jīng)一步研究。
【圖文】：

與空白對(duì)照組比較：**P＜0.01，與假手術(shù)組比較：## P＜0.012 不同組大鼠脊髓組織病理改變結(jié)果光鏡下結(jié)果顯示：假手術(shù)組組織結(jié)構(gòu)完好（圖1A）。手術(shù)組6 h時(shí)脊髓結(jié)構(gòu)出現(xiàn)破壞，損傷節(jié)段灰質(zhì)出血水腫（圖1 B圖中箭頭所示區(qū)域）嚴(yán)重并出現(xiàn)神經(jīng)元壞死，前后角神經(jīng)元存在。手術(shù)組12h時(shí)脊髓破壞進(jìn)一步加重，灰質(zhì)中有少量神經(jīng)元，僅存在后角；白質(zhì)中可見(jiàn)腫脹軸突和大量空泡（圖1 C箭頭所示區(qū)域）。24h時(shí)脊髓結(jié)構(gòu)破壞和神經(jīng)元壞死區(qū)域從損傷節(jié)段向周?chē)鷶U(kuò)散，損傷程度與12h相比沒(méi)有明顯差別。表 3 大鼠脊髓損傷后不同時(shí)間點(diǎn) CBS 評(píng)分值（x±s）術(shù)前 術(shù)后 6h 術(shù)后 12h 術(shù)后 24h空白組 100±0 100±0 100±0 100±0假手術(shù)組 100±0 97.5±0.5 97.86±0.25 97.5±0.5手術(shù)組 100±0 5.5±0.86**##8.0±2.0**##7.33±1.44**##

3 TUNEL法檢測(cè)脊髓組織中細(xì)胞凋亡情況結(jié)果利用光學(xué)顯微鏡觀察3組TUNEL染色的切片，陽(yáng)性細(xì)胞即為凋亡細(xì)胞，，凋亡的細(xì)胞呈紫藍(lán)色，凋亡的細(xì)胞核呈現(xiàn)褐色。假手術(shù)組偶有陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)，且數(shù)量很少。（圖2A箭頭所指）不同時(shí)間點(diǎn)手術(shù)組脊髓組織中凋亡的細(xì)胞數(shù)均比假手術(shù)組和空白組明顯升高（P<0.05）。手術(shù)組在6h時(shí)出現(xiàn)陽(yáng)性細(xì)胞，主要位于灰質(zhì)（圖2B箭頭所示），此后逐漸增多，在12h陽(yáng)性細(xì)胞素達(dá)最高（圖2C箭頭所示）。手術(shù)組在12h、24h時(shí)脊髓組織中凋亡的細(xì)胞數(shù)均高于6h時(shí)（P<0.05）； 手術(shù)組在12h和24h時(shí)凋亡的細(xì)胞數(shù)無(wú)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。具體數(shù)值見(jiàn)（表4）。A 假手術(shù)組 B 手術(shù)組術(shù)后 6h C 手術(shù)組術(shù)后 12h D 手術(shù)組術(shù)后 24h圖2 脊髓組織細(xì)胞凋亡情況（TUNEL×200）
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R651.2

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2562288