【摘要】：背景:肢體延長(zhǎng)技術(shù)是應(yīng)用牽張成骨原理解決臨床上肢體短縮畸形的有效手段,相關(guān)基礎(chǔ)研究的發(fā)展使其技術(shù)日益成熟并在臨床上有效廣泛應(yīng)用。牽張成骨過程常伴有并發(fā)癥出現(xiàn),如肌肉攣縮、關(guān)節(jié)僵直、牽拉致周圍神經(jīng)血管的損傷等。Paley等在1990就提出了肢體延長(zhǎng)中面臨的最大挑戰(zhàn)不是骨,而是骨骼肌。據(jù)檢索國(guó)內(nèi)外對(duì)骨緩慢延長(zhǎng)引起的周圍軟組織損傷方面的基礎(chǔ)研究相對(duì)較少,只有深入探索被延伸骨骼肌的損傷修復(fù)機(jī)制,保持在肌肉功能正常前提下才能夠完成肢體延長(zhǎng)的順利進(jìn)程。目的:應(yīng)用單臂外固定支架建立兔脛骨骨干截骨延長(zhǎng)的動(dòng)物模型,在脛骨緩慢延長(zhǎng)不同比例的各礦化時(shí)間點(diǎn)觀察被牽拉腓腸肌的組織學(xué)結(jié)構(gòu)變化特點(diǎn),研究力生長(zhǎng)因子(MGF)、細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子pax7和成肌分化抗原Myo D在該過程中的表達(dá)變化趨勢(shì),分析DO中骨骼肌對(duì)牽拉的承受能力,探索牽拉腓腸肌損傷修復(fù)的適應(yīng)性改建過程中的分子機(jī)制。方法:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選取成年日本大耳白兔,隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。對(duì)照組僅行截骨術(shù),不進(jìn)行骨延長(zhǎng),術(shù)后一周取材腓腸肌;實(shí)驗(yàn)組根據(jù)脛骨延長(zhǎng)幅度分為延長(zhǎng)10%組,延長(zhǎng)20%組,延長(zhǎng)30%組,3個(gè)實(shí)驗(yàn)組根據(jù)礦化時(shí)間點(diǎn)各分為5組:礦化0天(延長(zhǎng)終止日,M0)、礦化7天(M7)、礦化14天(M14)、礦化28天(M28)和礦化56天(M56)。各時(shí)間點(diǎn)X線攝片后取材術(shù)側(cè)腓腸肌中段,固定后石蠟包埋切片,行HE染色和特異抗體的組織化學(xué)染色,光鏡下觀察腓腸肌組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化過程以及MGF、Pax7和Myod在牽拉不同長(zhǎng)度下不同時(shí)相中的表達(dá)變化情況,陽(yáng)性部分進(jìn)行圖像分析,總結(jié)數(shù)據(jù)變化規(guī)律并分析原因。結(jié)果:1.動(dòng)物模型制備技術(shù)的優(yōu)化保證各組實(shí)驗(yàn)材料的順利獲取。根據(jù)取材前X線檢查和動(dòng)物肢體外觀觀察,在脛骨延長(zhǎng)原長(zhǎng)度的20%以下,隨骨延長(zhǎng)幅度的增加,骨痂的形成量在相同礦化時(shí)間會(huì)相對(duì)減少;在相同延長(zhǎng)幅度下,隨礦化期延長(zhǎng),骨痂逐漸形成并清晰,骨痂量逐漸增多,骨髓腔出現(xiàn),骨痂愈合。但是延長(zhǎng)增至原長(zhǎng)度的30%,骨痂形成極為緩慢,至D56組仍不能達(dá)到骨的滿意愈合。2.在牽張成骨過程中,延長(zhǎng)10%和20%組被同期延長(zhǎng)的腓腸肌在牽拉期和礦化早期出現(xiàn)明顯的損傷性改變,隨牽拉長(zhǎng)度增加損傷程度加重,在礦化后期均出現(xiàn)骨骼肌的適應(yīng)性修復(fù),D56組基本恢復(fù)骨骼肌的正常形態(tài)結(jié)構(gòu),光鏡下可見明顯的肌纖維結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常;但是延長(zhǎng)30%組,腓腸肌經(jīng)過最大長(zhǎng)度牽拉后出現(xiàn)最嚴(yán)重的損傷表現(xiàn),并且不可恢復(fù),無(wú)論骨還是骨骼肌的損傷均為不可修復(fù)狀態(tài)。3.在脛骨延長(zhǎng)不同長(zhǎng)度下的不同時(shí)期,腓腸肌中MGF、Pax7和Myod表達(dá)量不同且有一定的表達(dá)規(guī)律。對(duì)照組中各時(shí)間點(diǎn)腓腸肌MGF、Pax7和Myod表達(dá)均為陰性或弱陽(yáng)性。隨著脛骨延長(zhǎng)的發(fā)生,腓腸肌MGF的表達(dá)在礦化初始(D0組)即呈現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),礦化7天表達(dá)下降但仍為陽(yáng)性水平,礦化14天和礦化28天,MGF表達(dá)降低程度明顯,為弱陽(yáng)性或陰性,至礦化56天MGF表達(dá)和對(duì)照組無(wú)差異:Pax-7的表達(dá)變化則在礦化初始(D0組)和礦化7天時(shí)均為強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),礦化14天時(shí)陽(yáng)性表達(dá)減弱,但仍為陽(yáng)性,礦化28天時(shí)表達(dá)降低呈現(xiàn)出陰性或弱陽(yáng)性表達(dá),至礦化56天與對(duì)照組無(wú)差異;Myo D在礦化0天時(shí)表達(dá)呈陰性,隨礦化時(shí)間延長(zhǎng)至礦化7天出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá),礦化14天Myo D表達(dá)量達(dá)到峰值,為強(qiáng)陽(yáng)性,隨后表達(dá)緩慢減弱,礦化28天時(shí)呈陽(yáng)性或弱陽(yáng)性表達(dá),至礦化56天Myo D表達(dá)和對(duì)照組無(wú)明顯差異。結(jié)論:1.動(dòng)物模型需要不斷改進(jìn)才會(huì)獲得成效高的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。骨延長(zhǎng)技術(shù)有一定的限度,超過限度(大于肢體長(zhǎng)度30%的延長(zhǎng))的延長(zhǎng)成功性較差。2.適當(dāng)?shù)墓菭坷娱L(zhǎng)比例在緩慢牽拉速率下對(duì)受牽拉損傷的骨骼肌所導(dǎo)致的亞臨床損傷是短暫的并且是可逆的。牽拉損傷的腓腸肌隨礦化時(shí)間的延長(zhǎng),可以自行得到適應(yīng)性修復(fù)。但在延長(zhǎng)30%或以上,骨骼肌則會(huì)出現(xiàn)不可逆損傷。3.牽張成骨過程中,MGF、Pax7和Myod的表達(dá)變化和腓腸肌的組織學(xué)變化規(guī)律并不相同,都會(huì)有特定的表達(dá)高峰時(shí)期,后期均會(huì)表現(xiàn)為未損傷前的表達(dá)水平。這種表達(dá)變化趨勢(shì)說明作為肌衛(wèi)星細(xì)胞的主要標(biāo)志物,在骨骼肌的適應(yīng)性牽拉損傷修復(fù)過程中有積極的參與作用,對(duì)腓腸肌損傷后的再生修復(fù)起到關(guān)鍵作用。
【圖文】：

圖 1 單臂外固定延長(zhǎng)支架圖 圖 2 骨科器械(實(shí)驗(yàn)用)1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型及分組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物成年日本大耳白兔 47 只，雌雄不限，平均月齡 5.5，平均體重 2.85kg，天津醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，全部實(shí)驗(yàn)用兔體重?zé)o顯著性差異(P>0.05)，分籠喂養(yǎng)，全價(jià)營(yíng)養(yǎng)顆粒飼料喂食，飲水不限，采光通風(fēng)條件均等。實(shí)驗(yàn)中如果出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)失敗或動(dòng)物死亡等，隨機(jī)用同種同月齡體重的動(dòng)物進(jìn)行補(bǔ)充。實(shí)驗(yàn)分組選取成年的日本大耳白兔，隨機(jī)分為對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組 2 只，實(shí)驗(yàn)組 45 只。對(duì)照組只行截骨術(shù)，不進(jìn)行骨延長(zhǎng)，一周后取材術(shù)側(cè)腓腸肌中段；實(shí)驗(yàn)組根據(jù)延長(zhǎng)幅度隨機(jī)細(xì)分成延長(zhǎng) 10%組(延長(zhǎng)動(dòng)物脛骨原長(zhǎng)度的 10%)，延長(zhǎng)20%組，延長(zhǎng) 30%組，每組通過礦化期時(shí)間再各分成 5 組：即延長(zhǎng)終止日(礦化期 0 天，M0），延長(zhǎng)終止后 7 日（礦化期 7 天，M 7），延長(zhǎng)終止后 14 日(礦化期 14 天，M 14），延長(zhǎng)終止后 28 日（礦化期 28 天，M 28），，和延長(zhǎng)終止后56 日（礦化期 56 天，M 56）。

圖 1 單臂外固定延長(zhǎng)支架圖 圖 2 骨科器械(實(shí)驗(yàn)用)1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型及分組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物成年日本大耳白兔 47 只，雌雄不限，平均月齡 5.5，平均體重 2.85kg，天津醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，全部實(shí)驗(yàn)用兔體重?zé)o顯著性差異(P>0.05)，分籠喂養(yǎng)，全價(jià)營(yíng)養(yǎng)顆粒飼料喂食，飲水不限，采光通風(fēng)條件均等。實(shí)驗(yàn)中如果出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)失敗或動(dòng)物死亡等，隨機(jī)用同種同月齡體重的動(dòng)物進(jìn)行補(bǔ)充。實(shí)驗(yàn)分組選取成年的日本大耳白兔，隨機(jī)分為對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組 2 只，實(shí)驗(yàn)組 45 只。對(duì)照組只行截骨術(shù)，不進(jìn)行骨延長(zhǎng)，一周后取材術(shù)側(cè)腓腸肌中段；實(shí)驗(yàn)組根據(jù)延長(zhǎng)幅度隨機(jī)細(xì)分成延長(zhǎng) 10%組(延長(zhǎng)動(dòng)物脛骨原長(zhǎng)度的 10%)，延長(zhǎng)20%組，延長(zhǎng) 30%組，每組通過礦化期時(shí)間再各分成 5 組：即延長(zhǎng)終止日(礦化期 0 天，M0），延長(zhǎng)終止后 7 日（礦化期 7 天，M 7），延長(zhǎng)終止后 14 日(礦化期 14 天，M 14），延長(zhǎng)終止后 28 日（礦化期 28 天，M 28），和延長(zhǎng)終止后56 日（礦化期 56 天，M 56）。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R687.3

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本文編號(hào)：2534426