【摘要】：目的:回顧性分析已納入本研究但尚未進(jìn)行基因診斷的9個(gè)骨硬化癥家系/(無(wú)家系)先證者的臨床資料;對(duì)所有臨床診斷或者擬診常染色體顯性遺傳骨硬化癥的先證者進(jìn)行CLCN7基因篩查。對(duì)于CLCN7基因篩查后未找到突變位點(diǎn)的先證者,再逐一篩查其余能導(dǎo)致骨硬化癥的致病基因;對(duì)所有擬診骨硬化癥合并腎小管酸中毒的先證者進(jìn)行CAII基因篩查,確定其突變位點(diǎn)及突變類型。對(duì)于臨床及基因均已確診的骨硬化癥先證者,對(duì)其相應(yīng)的突變蛋白進(jìn)行功能預(yù)測(cè),并嘗試探討其基因型和臨床表型的相關(guān)性。方法:收集自2008年起北京協(xié)和醫(yī)院內(nèi)分泌科臨床診斷或擬診骨硬化癥的9個(gè)家系/(無(wú)家系)先證者。⑴分析9個(gè)骨硬化癥家系/(無(wú)家系)先證者的遺傳方式,臨床表現(xiàn)及影像學(xué)特征;⑵對(duì)9個(gè)骨硬化癥家系先證者/(無(wú)家系)先證者及其家系中的親屬進(jìn)行基因突變檢測(cè);擬診常染色體顯性遺傳骨硬化癥的先證者針對(duì)CLCN7基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增測(cè)序;擬診常染色體隱性遺傳骨硬化癥合并腎小管酸中毒的先證者針對(duì)CAII基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增測(cè)序,如發(fā)現(xiàn)新的錯(cuò)義突變則在50例無(wú)關(guān)健康人群中進(jìn)行驗(yàn)證;⑶選取遺傳學(xué)已確診的錯(cuò)義突變的骨硬化癥先證者,應(yīng)用蛋白預(yù)測(cè)軟件Polyphen-2進(jìn)行突變體蛋白功能預(yù)測(cè),并探討其基因型和臨床表型的相關(guān)性;⑷對(duì)于遺傳學(xué)確診剪切位點(diǎn)突變的骨硬化癥先證者,進(jìn)行m RNA逆轉(zhuǎn)錄后RT-PCR分析,明確該剪切位點(diǎn)對(duì)于蛋白功能的影響。結(jié)果:1.本研究確診了6例ADOⅡ患者和1例IARO患者,基因檢測(cè)證實(shí)了8個(gè)CLCN7基因突變,其中2個(gè)(c.856CT,p.R286W;c.637CT,P.L213F)為已報(bào)道的突變;5個(gè)(c.1039GA,p.G347R;c.976AG,p.R326G;c.869CA,p.S290Y;c.1691TC,p.L564P;c.671TG,p.L224R)為新發(fā)的錯(cuò)義突變,1個(gè)(p.L224R,p.K691FS)剪切位點(diǎn)的新發(fā)突變。該發(fā)現(xiàn)極大的擴(kuò)大了CLCN7基因突變數(shù)據(jù)庫(kù)。同時(shí)本研究總結(jié)并比較了CLCN7相關(guān)性的ADOⅡ和IARO患者分別在臨床特征和基因分型方面的異同點(diǎn),有助于提高臨床醫(yī)師對(duì)該種疾病的認(rèn)識(shí)。2.本研究報(bào)道了中國(guó)首例CAII相關(guān)性骨硬化癥,通過(guò)CAII基因檢測(cè)證實(shí)了CAII基因的2個(gè)新發(fā)突變(c.T381G,p.Y127X,c.350+2TC,IVS3+2TC),豐富了CAII基因突變數(shù)據(jù)庫(kù)。通過(guò)臨床觀察和分子生物學(xué)研究,提高了我們對(duì)于這種疾病的認(rèn)識(shí)。然而,對(duì)于蛋白截短長(zhǎng)度更短的CAII基因的無(wú)義突變或剪切突變可引起的更為惡性的臨床表現(xiàn),我們僅限于推測(cè),還存在一定的局限性。因此,后續(xù)的研究應(yīng)致力于收集更多的CAII相關(guān)性骨硬化癥患者的臨床資料去明確其基因型和表型的關(guān)系。結(jié)論:在本研究所納入臨床診斷或擬診骨硬化癥的患者中,最終確診了CLCN7相關(guān)性骨硬化癥ADOⅡ患者6例,CLCN7相關(guān)性骨硬化癥IARO患者1例以及ARO合并RTA患者2例。共發(fā)現(xiàn)致病基因突變10個(gè),其中CLCN7基因突變8個(gè),包含兩個(gè)已報(bào)道的錯(cuò)義突變(p.R286W,p.L213F);7個(gè)新發(fā)突變,其中6個(gè)為新發(fā)錯(cuò)義突變(p.L224R,p.S290Y,p.R326G,p.G347R,p.L564P),一個(gè)新發(fā)剪切位點(diǎn)的突變(p.K691FS)。CAII基因突變2個(gè),均為新發(fā)突變,分別為c.350+2TC,IVS3+2TC剪切位點(diǎn)突變和c.T381C p.Y127X無(wú)義突變。將所有已證實(shí)的新發(fā)錯(cuò)義突變經(jīng)過(guò)Ployphen2蛋白功能軟件預(yù)測(cè),均顯示這些突變可嚴(yán)重?fù)p害蛋白編碼的正常功能。本研究在中國(guó)人群中證實(shí)了CLCN7和CAII基因是骨硬化癥的致病基因,并進(jìn)一步豐富了骨硬化癥相關(guān)致病基因數(shù)據(jù)庫(kù)。
【圖文】：

圖 2-1 家系 1 先證者：A 頭顱側(cè)位相：可見(jiàn)顱骨及顱底骨密度增厚(如箭頭所示)；B 胸腰椎側(cè)位相：椎骨骨密度增高，呈“夾心椎”樣(如箭頭所示)；C 髂骨正位片：骨密度不均勻增高，可見(jiàn)“骨中骨”現(xiàn)象(如箭頭所示)。2.1.1.2 家系 2先證者：馬 X，男性，7 歲，父母非近親結(jié)婚。患兒因嚴(yán)重的牙齒萌出異常行骨骼 X 線檢查發(fā)現(xiàn)特征性的骨硬化癥影像學(xué)表現(xiàn)，，診斷為“骨硬化癥”。患兒目前身高 116cm（低于同年齡同性別第二百分位數(shù)），體重 23kg。實(shí)驗(yàn)室檢查：

2-2 家系 2 先證者：頜骨正位像：嚴(yán)重的牙齒萌出異常 X，男性，11 歲，父母非近親結(jié)婚。2013 年因身骨骼 X 線檢查后診斷為“骨硬化癥”�；颊叩谝惶ゲ辉�。患者出牙時(shí)間與同齡兒同，智力未見(jiàn)落后。年齡同性別第三百分位數(shù)），體重 34kg。實(shí)驗(yàn)室檢
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R681

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本文編號(hào)：2529464