發(fā)布時間：2019-07-18 19:56

【摘要】：目的：構建過表達和沉默Idl基因的慢病毒載體,以兔椎間盤髓核細胞為研究對象,觀察經BMP一2誘導后的髓核細胞內Idl基因的表達水平調整以后細胞分泌軟骨特性因子的變化,研究Idl在BMPs維持椎間盤細胞軟骨表型中的作用。方法：(1)設計針對Id1基因過表達和RNA干擾(RNAi)的序列,應用基因重組技術將目的基因片段連接到慢病毒載體,然后感染293T細胞之后進行測序鑒定與病毒滴度檢測；(2)以兩種慢病毒分別感染兔髓核細胞,QRT-PCR和Western blot檢測髓核細胞Id1 mRNA和蛋白質的表達；(3)重組腺病毒AdBMP2感染髓核細胞后,利用已制備的兩種慢病毒再次感染細胞,QRT-PCR、ELISA檢測細胞表達軟骨特性分子的能力與變化趨勢。結果：(1)成功構建Id1基因過表達與RNAi漫病毒載體,測序結果與Id1基因序列比對后確認一致。(2)慢病毒感染髓核細胞后,Id1基因的mRNA與蛋白的表達量與正常細胞組及空載病毒感染組比,過表達組增加,RNAi組下降,符合預期結果。(3)細胞內Idl的表達增加可促進軟骨特性因子col Ⅱ(0.407±0.083)和ACAN(0.284±0.074)的mRNA表達。(4)AdBMP2處理細胞后,Id1基因表達增加可使col II(0.590±0.072)和ACAN(0.351±0.066)的mRNA表達進一步顯著升高；Idl表達降低時,以上因子的表達被明顯抑制(col II:0.244±0.060,ACAN:0.168±0.034).結論：Idl能夠促進兔椎間盤髓核細胞軟骨特性分子的表達,細胞內Idl基因水平變化能夠顯著影響B(tài)MP-2誘導細胞分泌軟骨特性因子。Idl是BMP-2維持兔髓核細胞軟骨特性作用的關鍵因子。
文內圖片：
圖片說明： Ｆｉｇ２－４邋Ｓ邋Ｔｈｅ邋ｉｎ化ｎｓｉｔｙ邋ｏｆ邋化ｒｇｅｔ邋ｂａｎｄ邋ｄｅｔｅｃｔｅｄ邋ｂｙ邋Ｗｅｓ化ｍ邋ｂｌｏｔ逡逑２．２．邋４邋Ｉｄｌ度病毒與ＡｄＢＭＰ２轉染細化后軟肯特性分子的表達逡逑ＱＲＴ－ＰＣＲ檢測軟骨特性分子ｃｏｌ邋ＩＩ、ＡＣＡＮ和Ｉｄｌ如表２－２、圖２－５所示，（１）邋ＢＭＰ２逡逑組與ＧＦＰ姐相比，ｃｏｉｎ、ＡＣＡＮ、Ｉｄｌ的ｍＲＮＡ表達量明顯增加。（２）邋Ｉｄｌ過表達慢病毒逡逑＋Ｇ巧組與ＧＦＰ組相比，ｃｏｌｌｉ、ＡＣＡＮ、Ｉｄｌ表達量均增加；ＲＮＡｉ＋ＧＦＰ組與Ｇ巧組相比逡逑Ｗ上因子表達量減少。（３）邋Ｉｄｌ過表達慢病毒＋ＢＭＰ２組與ＢＭＰ２感染組相比，Ｉｄｌ的表逡逑達增加能夠最著促進ｃｏｌ邋ＩＩ、ＡＣＡＮ、Ｉｄｌ表達量顯著增加；Ｉｄｌ邋ＲＮＡｉ慢病毒＋ＢＭＰ２組與逡逑ＢＭＰ２組相比，Ｉｄｌ表達減少后，ＢＭＰ２誘導軟骨樣特性因子分泌的作用被明顯抑制。上逡逑述組間差異具有統(tǒng)計學意義。＜化０５）。逡逑表２－２：巧光定ｆＰＣＲ檢抓各組細化ｃｏｉｎ、ＡＣＡＮ、Ｉｄｌ的ｍＲＮＡ的表達（ｎ－３，文±邋Ｓ）逡逑Ｔａｂ２－２：ｍＲＮＡｅｘｐｉ＊ｅｓｓｉｏｎｏｆｃｏｉｎ、ＡＣＡＮ、ＩｄｌｄｅＷｄｅｄｂ》＇ＱＲＴ－ＰＣＲ（ｆｌ—３，Ａ＂±Ｓ）逡逑
文內圖片：
圖片說明： Ｆｉｇ２－４邋Ｓ邋Ｔｈｅ邋ｉｎ化ｎｓｉｔｙ邋ｏｆ邋化ｒｇｅｔ邋ｂａｎｄ邋ｄｅｔｅｃｔｅｄ邋ｂｙ邋Ｗｅｓ化ｍ邋ｂｌｏｔ逡逑２．２．邋４邋Ｉｄｌ度病毒與ＡｄＢＭＰ２轉染細化后軟肯特性分子的表達逡逑ＱＲＴ－ＰＣＲ檢測軟骨特性分子ｃｏｌ邋ＩＩ、ＡＣＡＮ和Ｉｄｌ如表２－２、圖２－５所示，（１）邋ＢＭＰ２逡逑組與ＧＦＰ姐相比，ｃｏｉｎ、ＡＣＡＮ、Ｉｄｌ的ｍＲＮＡ表達量明顯增加。（２）邋Ｉｄｌ過表達慢病毒逡逑＋Ｇ巧組與ＧＦＰ組相比，ｃｏｌｌｉ、ＡＣＡＮ、Ｉｄｌ表達量均增加；ＲＮＡｉ＋ＧＦＰ組與Ｇ巧組相比逡逑Ｗ上因子表達量減少。（３）邋Ｉｄｌ過表達慢病毒＋ＢＭＰ２組與ＢＭＰ２感染組相比，Ｉｄｌ的表逡逑達增加能夠最著促進ｃｏｌ邋ＩＩ、ＡＣＡＮ、Ｉｄｌ表達量顯著增加；Ｉｄｌ邋ＲＮＡｉ慢病毒＋ＢＭＰ２組與逡逑ＢＭＰ２組相比，Ｉｄｌ表達減少后，ＢＭＰ２誘導軟骨樣特性因子分泌的作用被明顯抑制。上逡逑述組間差異具有統(tǒng)計學意義。＜化０５）。逡逑表２－２：巧光定ｆＰＣＲ檢抓各組細化ｃｏｉｎ、ＡＣＡＮ、Ｉｄｌ的ｍＲＮＡ的表達（ｎ－３，文±邋Ｓ）逡逑Ｔａｂ２－２：ｍＲＮＡｅｘｐｉ＊ｅｓｓｉｏｎｏｆｃｏｉｎ、ＡＣＡＮ、ＩｄｌｄｅＷｄｅｄｂ》＇ＱＲＴ－ＰＣＲ（ｆｌ—３，Ａ＂±Ｓ）逡逑
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R681.5

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 張麗;關曉明;馬迅;滿孝旭;趙勝;;人端粒酶反轉錄酶基因感染對人髓核細胞基本特性的影響[J];中國藥物與臨床;2013年S1期

2 李鋒;李光輝;陶鳳華;郭風勁;許濤;潘峰;;兔髓核細胞誘導大鼠骨髓間充質干細胞分化為髓核細胞的研究[J];生物骨科材料與臨床研究;2006年06期

3 李旭;侯筱魁;湯亭亭;李惠武;郭剛;裴國獻;;人轉化生長因子β_1重組腺病毒轉染傳代髓核細胞對細胞外基質合成的影響[J];中國修復重建外科雜志;2007年12期

4 伊友明;陶鳳華;杜靜;潘峰;李鋒;;轉化生長因子-β1和胰島素樣生長因子-1對兔退變髓核細胞生物學活性的影響[J];華中醫(yī)學雜志;2009年03期

5 劉瑞平;徐南偉;;退變兔髓核細胞和正常髓核細胞生物學特性的比較[J];實用臨床醫(yī)藥雜志;2009年21期

6 梁偉國;葉冬平;戴麗冰;沈雁;;體外培養(yǎng)人正常椎間盤髓核細胞與退變髓核細胞的生物學性狀比較:可以為干預退變髓核細胞提供最佳時機嗎?[J];中國組織工程研究與臨床康復;2010年28期

7 王鋒;朱悅;;影響髓核細胞表達水通道蛋白1相關因素的實驗研究[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2011年06期

8 牛建鵬;衛(wèi)陳剛;任龍韜;;髓核細胞及其生物力學研究進展[J];臨床醫(yī)藥實踐;2011年08期

9 李鋒生;梁偉國;葉冬平;戴麗冰;陳鴻輝;;體外培養(yǎng)人退變髓核細胞的生物學性狀[J];中國組織工程研究與臨床康復;2011年28期

10 滿孝旭;馬迅;關曉明;張麗;;肝細胞生長因子對體外培養(yǎng)的人退變髓核細胞生物學活性影響[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2011年24期

相關會議論文 前10條

1 趙秀寶;馬信龍;馬劍雄;李稚君;李爽;孫曉雷;;周期性牽張力聯(lián)合灌注培養(yǎng)對大鼠髓核細胞影響的研究[A];天津市生物醫(yī)學工程學會第30次學術年會暨生物醫(yī)學工程前沿科學研討會論文集[C];2010年

2 王會仁;董健;周曉崗;李熙雷;林紅;;人脂肪及骨髓來源間充質干細胞與髓核細胞非接觸共培養(yǎng)后的類髓核分化效應研究[A];第十九屆全國中西醫(yī)結合骨傷科學術研討會論文匯編[C];2012年

3 李長青;周躍;羅剛;張傳志;;仿生髓核組織工程支架材料對體外培養(yǎng)髓核細胞合成代謝的影響[A];第八屆全國脊柱脊髓損傷學術會議論文匯編[C];2007年

4 余磊;廖華;熊紹虎;;人髓核細胞體外培養(yǎng)體系的建立[A];解剖學雜志——中國解剖學會2002年年會文摘匯編[C];2002年

5 梁偉國;葉冬平;戴麗冰;陳鴻輝;;BMP-2對人退變椎間盤髓核細胞影響的實驗研究[A];第20屆中國康協(xié)肢殘康復學術年會論文選集[C];2011年

6 梁偉國;葉冬平;戴麗冰;陳鴻輝;;bFGF對人退變椎間盤髓核細胞影響的實驗研究[A];第20屆中國康協(xié)肢殘康復學術年會論文選集[C];2011年

7 王海強;;CK8在退變椎間盤髓核細胞中的表達[A];中國中西醫(yī)結合學會脊柱醫(yī)學專業(yè)委員會第六屆學術年會論文集[C];2013年

8 葉冬平;梁偉國;戴麗冰;沈雁;;GFP-hTERT轉染人正常髓核細胞構建永生化髓核細胞株的實驗研究[A];第20屆中國康協(xié)肢殘康復學術年會論文選集[C];2011年

9 李長青;周躍;羅剛;張傳志;;仿生髓核組織工程支架材料對體外培養(yǎng)髓核細胞生長增殖的影響[A];第八屆全國脊柱脊髓損傷學術會議論文匯編[C];2007年

10 伍耀宏;徐寶山;李秀蘭;楊強;張楊;夏群;張春秋;許海委;;軟骨脫細胞基質多孔支架與山羊髓核細胞生物相容性研究[A];第十九屆全國中西醫(yī)結合骨傷科學術研討會論文匯編[C];2012年

相關博士學位論文 前10條

1 葉冬平;microRNA-155通過下調ERK1/2水平影響人正常椎間盤髓核細胞退變的實驗研究[D];暨南大學;2015年

2 高鋒;低強度脈沖超聲波促進人髓核細胞合成胞外基質功能性成分的體外實驗研究[D];蘇州大學;2011年

3 李喜功;人骨髓間充質干細胞與退變髓核細胞體外共培養(yǎng)的實驗研究[D];蘇州大學;2011年

4 張曉軍;低強度脈沖超聲對立體培養(yǎng)的人退變椎間盤髓核細胞的影響實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學;2013年

5 馬凱歌;自噬參與壓力誘導的髓核細胞損傷及其機制研究[D];華中科技大學;2014年

6 石健;人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7基因轉染對原代培養(yǎng)兔髓核細胞生物學活性的影響[D];第二軍醫(yī)大學;2006年

7 李政;瘦素在人腰椎間盤髓核退變中的作用及機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

8 王大武;SIRT1對退變椎間盤髓核細胞凋亡調控及分子機制研究[D];重慶醫(yī)科大學;2012年

9 夏平;地塞米松對兔椎間盤髓核細胞增殖及聚集蛋白聚糖表達的影響[D];武漢大學;2010年

10 王平;限制性與非限制性壓應力對椎間盤髓核細胞表達蛋白多糖的影響[D];重慶大學;2011年

相關碩士學位論文 前10條

1 任國梁;退變毮核細胞拉伸實驗的形態(tài)學研究[D];山西醫(yī)科大學;2015年

2 唐浩;CD24在人髓核細胞鑒定應用中的相關研究[D];昆明醫(yī)科大學;2015年

3 劉永明;過表達NDRG2基因促進人髓核細胞衰老的體外實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

4 楊晨;活化T細胞核因子對髓核細胞中ADAMTS-4及-5表達的調控作用[D];第二軍醫(yī)大學;2015年

5 胡津銓;骨髓間充質干細胞對于髓核細胞炎性損傷的保護作用[D];第二軍醫(yī)大學;2015年

6 趙光宇;不同共培養(yǎng)條件下兔NPCs誘導BMSCs向類髓核細胞分化的實驗研究[D];昆明醫(yī)科大學;2015年

7 周栩;Id1基因對BMP-2維持兔髓核細胞軟骨特性的影響[D];重慶醫(yī)科大學;2015年

8 徐遠;大鼠骨髓間充質干細胞與髓核細胞體外共培養(yǎng)的實驗研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2011年

9 衛(wèi)陳剛;正常和退變髓核細胞粘彈性的測量[D];山西醫(yī)科大學;2011年

10 于鵬;兔骨髓間充質干細胞與髓核細胞共培養(yǎng)體系的實驗研究[D];華中科技大學;2010年

，

本文編號：2516038