【摘要】：目的:體外研究已證實低氧培養(yǎng)脂肪間充質(zhì)干細胞(ADMSCs)可以提高它的的生存能力以及向肌腱細胞分化的潛能,本研究通過對ADMSCs經(jīng)低氧預培養(yǎng)后再復合小腸粘膜下層(SIS)修復大鼠跟腱缺損的體內(nèi)研究探討ADMSCs復合SIS構建組織工程肌腱修復肌腱缺損的可能性,并進一步探討低氧是否能促進ADMSCs復合SIS治療肌腱缺損的治療效果,為治療肌腱損傷提供一種新的理論依據(jù)。方法:從Sprague-Dawley大鼠的脂肪組織分離、提取ADMSCs,并對其進行純化、傳代培養(yǎng),將第3代ADMSCs采用流式細胞儀檢測ADMSCs表面標志物的表達。將第3代ADMSCs分成兩組,分別置于常氧(20%02)與低氧(2%02)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7天,然后采用CM-DiI標記兩組細胞,再將標記的ADMSCs復合SIS后在常氧條件下培養(yǎng)48小時。選取50只(250—300g)雄性SD大鼠,隨機選取30只分成A、B、C三組,每組10只,剩余20只大鼠左側(cè)跟腱記為D租,右側(cè)跟腱記為E組。將A組作為假手術組,將B、C、D、E四組大鼠雙側(cè)跟腱的外側(cè)束與后束去掉約0.5cm,作為大鼠跟腱缺損的模型,其中將B組作為自體肌腱移植組、C組作為單純SIS組、D組作為常氧ADMSCs復合SIS組、E組作為低氧ADMSCs復合SIS組,采用改良的Kessler縫合法將自體離斷的跟腱或SIS縫在缺損的跟腱上,然后將所有實驗組雙腿行石膏外固定,四周后觀察移植段的大體情況,并進行HE、masson染色、免疫組織化學檢查、圖像分析以及生物力學測試。結(jié)果:(1)術后4周移植段he染色結(jié)果顯示:a組可見肌腱細胞稀少且呈細小長梭形,肌腱膠原纖維呈致密波浪狀并朝一個方向排列;b組可見大量成纖維細胞,細胞外基質(zhì)排列順序紊亂;c組、d組以及e組的sis上均有長梭形細胞沿著細胞外基質(zhì)朝一個方向有規(guī)律的排列,e組中長梭形細胞數(shù)的比例高于c、d兩組,但d組的長梭形細胞數(shù)卻高于c組,c、d、e三組中,e組的細胞外基質(zhì)最多,但d組的細胞外基質(zhì)卻多于c組。(2)4周后masson染色顯示:a組膠原纖維呈藍色,細胞質(zhì)呈紅色,細胞核呈黑色,可見少量的梭形細胞沿膠原纖維方向排列;b組可見大量沿膠原纖維排列的梭形細胞,但膠原纖維呈無規(guī)則排列;c組、d組以及e組均有不同數(shù)量的長梭形細胞沿著膠原纖維朝一個方向有規(guī)律的排列,e組膠原纖維的沉積量最大、且排列順序最整齊,但d組膠原纖維的沉積量以及排列順序要優(yōu)于c組。(3)d組與e組移植段免疫組織化學檢查顯示:d組與e組的長梭形細胞和橢圓形細胞中均有大量的腱調(diào)蛋白(tnmd)蛋白以及mkx(mohawkhomeobox)蛋白表達,通過對mkx蛋白表達陽性細胞數(shù)分析,e組中表達mkx陽性細胞數(shù)要明顯高于d組(p0.05)。以上結(jié)果表明e組移植段比d組更易塑造成肌腱樣組織。(4)d組與e組移植段admscs檢測與mkx免疫熒光化學染色檢查顯示:d組與e組均有大量的admscs存在,并且e組表達mkx蛋白陽性admscs的數(shù)量比例要高于d組(p0.05)。(5)4周后生物力學測試顯示:e組破壞力(32.34±2.71)n要高于c組(20.33±1.47)n及d組(27.78±2.11)n(p0.05),e組最接近b組(37.62±1.54)n(p0.05),而d組高于c組(p0.05)。結(jié)論:(1)admscs復合sis構建組織工程肌腱修復肌腱缺損的治療效果要優(yōu)于單純利用SIS修復。(2)低氧可以促進ADMSCs復合SIS治療肌腱缺損的治療效果。(3)附在SIS上的ADMSCs可能分化成了肌腱樣細胞,并且低氧對ADMSCs向肌腱樣細胞分化可能起到了促進作用。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：西南醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R687.2

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