發(fā)布時間：2018-11-04 12:57

【摘要】：骨關節(jié)炎(Osteoarthritis,OA)是一種常見的退行性關節(jié)病,以在關節(jié)邊緣處有軟骨退化損傷、骨刺增生和痛感為特征。一般來說,骨關節(jié)炎與年齡、肥胖、勞損、創(chuàng)傷、關節(jié)先天性異常以及其它全身性疾病相關。骨關節(jié)炎分為原發(fā)性骨關節(jié)炎和繼發(fā)性骨關節(jié)炎兩種。許多研究已經表明,炎性細胞因子與骨關節(jié)炎的炎性反應相關,如:IL-1β、TNF-α、CXCL8、MMP3在骨關節(jié)炎疾病發(fā)生發(fā)展起到非常重要的作用;而調節(jié)性細胞因子則能抑制炎性細胞因子的表達和活性,從而緩解滑膜炎癥反應和減輕關節(jié)的病理進程。IL-37,是IL-1家族的一個新成員,主要分布在睪丸、胸腺、子宮,多種細胞可以分泌,如外周血單核細胞、樹突狀細胞、上皮細胞等。近幾年來,實驗指出,IL-37,是一種抑炎因子,能夠顯著抑制天然免疫和獲得性免疫。已有報道指出,IL-37在多種免疫性疾病中發(fā)揮抑炎功能,如缺血再灌注損傷、銀屑病、DSS結腸炎、肥胖。在炎癥環(huán)境下,IL-37能夠降低外周血單核細胞IL-1β、IL-1α、IL-8、TNF-α等炎性因子的表達。但至今,IL-37與骨關節(jié)炎的相關性尚未被闡述。本課題通過收集臨床OA患者和健康人外周血樣本,檢測IL-37的表達水平,探討IL-37表達水平與OA臨床指標、炎性介質的關系;利用IL-37重組蛋白體外刺激OA患者的外周血單個核細胞、滑膜細胞的試驗,探討IL-37在OA炎癥中的作用。目的檢測IL-37在OA患者外周血的表達水平;探討IL-37表達水平與OA臨床指標、炎性介質的相關性;研究IL-37是否在OA中能夠調控相關炎性因子的表達。方法1.標本采集及處理(收集OA疾病患者及健康對照者外周血及滑膜組織);2.RT-PCR檢測OA疾病患者及健康人PBMCs IL-37 mRNA的表達;3.ELISA檢測OA疾病患者及健康人的血清IL-37蛋白的水平;4.收集臨床數據,分析PBMC IL-37的mRNA和血清IL-37的蛋白水平與OA臨床指標的相關性;5.RT-PCR檢測TNF-α、IL-1β、CXCL8、MMP-3在OA患者和健康人PBMCs的mRNA表達;6.ELISA檢測TNF-α、IL-1β、CXCL8、MMP-3在OA患者和健康人血清的蛋白水平;7.構建IL-37表達質粒,表達IL-37重組蛋白,純化,并檢測重組IL-37的生物學功能;8.分離OA患者及健康對照者PBMCs,進行培養(yǎng),IL-37重組蛋白刺激或不刺激收集細胞,RT-PCR和ELISA檢測在有無IL-37刺激的條件下TNF-α、IL-1β、CXCL8、MMP-3的表達量;9.分離OA疾病活動期患者的滑膜細胞,體外培養(yǎng),IL-37重組蛋白進行刺激,收集細胞,RT-PCR和ELISA檢測TNF-α、IL-1β、CXCL8、MMP-3的表達量。結果1.RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn),與對照組相比,OA患者PBMCs的IL-37mRNA表達量明顯增高,尤其是OA疾病活動期患者;2.ELISA檢測發(fā)現(xiàn),與對照組相比,OA患者血清IL-37蛋白水平顯著增高,尤其是OA疾病活動期患者;3.將所采集骨關節(jié)炎患者IL-37的水平與臨床指標進行統(tǒng)計分析,結果顯示OA患者血清IL-37與BMI、CRP、WOMAC呈顯著正相關;4.RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn),與健康對照組相比,OA患者PBMCs TNF-α、IL-1β、CXCL8、MMP-3 mRNA表達明顯增高;5.ELISA檢測發(fā)現(xiàn),與健康對照組相比,OA患者血清TNF-α、IL-1β、CXCL8、MMP-3蛋白表達明顯增高;6.統(tǒng)計學分析,OA患者血清IL-37蛋白表達與TNF-α、IL-1β、CXCL8、MMP-3呈正相關;7.RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn),IL-37重組蛋白在體外實驗中能夠顯著抑制OA患者PBMCs TNF-α、IL-1β、CXCL8、MMP-3 mRNA表達,IL-37重組蛋白對健康人無明顯作用;8.ELISA檢測發(fā)現(xiàn),IL-37重組蛋白在體外實驗中能夠顯著抑制OA患者血清TNF-α、IL-1β、CXCL8、MMP-3蛋白表達,IL-37重組蛋白對健康人無明顯作用;9.RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn),IL-37重組蛋白在體外實驗中能夠明顯抑制OA疾病活動期患者滑膜細胞TNF-α、IL-1β、CXCL8、MMP-3的mRNA表達;10.ELISA檢測發(fā)現(xiàn),IL-37重組蛋白在體外實驗中能夠明顯抑制OA疾病活動期患者滑膜細胞TNF-α、IL-1β、CXCL8、MMP-3的蛋白水平。結論1.IL-37的水平與OA的疾病活動度呈正相關;2.IL-37與骨關節(jié)炎疾病相關的炎性介質TNF-α,IL-1β,CXCL8,MMP3正相關;3.IL-37能夠抑制與OA密切相關炎性介質的表達。
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【學位授予單位】：深圳大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R684.3

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本文編號：2309880