【摘要】：該實驗觀察白藜蘆醇(Resveratrol,Resv)對兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞去分化現(xiàn)象的作用并探討其可能的機制。首先,在無菌條件下取4周齡兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,行軟骨細(xì)胞鑒定后將細(xì)胞隨機分成5組:空白組、0μmol/L Resv組、2.5μmol/L Resv組、5μmol/L Resv組和10μmol/L Resv,體外單層培養(yǎng)傳代至第5代。分別取P1、P3、P5代細(xì)胞在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化,倒置相差顯微鏡下觀察到各組P1代軟骨細(xì)胞形態(tài)基本一致,P3、P5代2.5μmol/L Resv組細(xì)胞形態(tài)變化不大,其余各組細(xì)胞出現(xiàn)胞體變大,胞漿變淡,鏡下胞核不明顯等衰老的形態(tài)變化;Alcian Blue染色檢測蛋白聚糖(Aggrecan)含量和β-半乳糖苷酶染色檢測衰老軟骨細(xì)胞,各組P1代細(xì)胞Alcian Blue染色和β-半乳糖苷酶染色無明顯差別,P3、P5代2.5μmol/L白藜蘆醇組較其他組明顯深染、衰老軟骨細(xì)胞數(shù)明顯減少;RT-PCR檢測蛋白多糖(Aggrecan),沉默信息調(diào)節(jié)因子1(SIRT1),抑癌基因p53、p21以及P16的表達,2.5μmol/L Resv組的Aggrecan和SIRT1基因表達明顯上調(diào),P53、P21及P16基因表達顯著下調(diào)。綜上所述:低濃度白藜蘆醇(2.5μmol/L)可能通過上調(diào)SIRT1,下調(diào)P53、P21、P16基因的表達抑制軟骨細(xì)胞去分化的現(xiàn)象。
[Abstract]:The effect of resveratrol on dedifferentiation of rabbit articular chondrocytes was observed and its possible mechanism was discussed. Firstly, the articular chondrocytes of rabbits at 4 weeks of age were collected under aseptic condition. The chondrocytes were randomly divided into five groups: blank group (0 渭 mol/L Resv), 2.5 渭 mol/L Resv group (5 渭 mol/L Resv) and 10 渭 mol/L Resv group. The changes of cell morphology were observed under inverted phase contrast microscope. The morphology of P1 passage chondrocytes in each group was basically consistent with that of P3 / P5 passage 2.5 渭 mol/L Resv group. The morphologic changes of senescence such as light cytoplasm and unclear nucleus under microscope were detected by Alcian Blue staining and 尾 -galactosidase staining for the detection of the content of proteoglycan (Aggrecan) and 尾 -galactosidase staining for the detection of aging chondrocytes. Alcian Blue staining and 尾 -galactosidase staining of P1 passage cells in each group had no significant difference. The resveratrol group of 2.5 渭 mol/L in P3P5 passage was significantly more deeply stained than other groups. The number of senescent chondrocytes was significantly decreased. The expression of Aggrecan and SIRT1 genes in the group of p53p21 and P16 expression of 2.5 渭 mol/L Resv was significantly up-regulated by RT-PCR, and the expression of P53P21 and P16 was down-regulated by RT-PCR. In conclusion, resveratrol at low concentration (2.5 渭 mol/L) may inhibit the dedifferentiation of chondrocytes by upregulating SIRT1 and down-regulating the expression of P53P21 / P16 gene.
【作者單位】： 南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院骨科;南昌大學(xué)研究生院醫(yī)學(xué)部;九江市武寧縣人民醫(yī)院;九江學(xué)院九江市轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)重點實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81160226)
【分類號】：R684

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本文編號：2189258