本文選題：Syndecan-4 + 椎間盤　； 參考：《蘇州大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：第一部分退變腰椎間盤髓核組織Syndecan-4蛋白的表達(dá)目的:研究Syndecan-4在退變的腰椎間盤髓核組織中的表達(dá),探討其與腰椎間盤退變的關(guān)系。方法:收集在骨科行腰椎后路減壓手術(shù)患者的椎間盤標(biāo)本,共18例。所有標(biāo)本按照Pfirrmann椎間盤退變分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí),退變程度在Ⅳ-Ⅴ級(jí)的標(biāo)本做為椎間盤退變組,共10例。退變程度在?-Ⅲ級(jí)的標(biāo)本做為對(duì)照組,共8例。所有椎間盤標(biāo)本分為兩份,一份置入液氮罐中保存,行RT-PCR檢測(cè),另一份甲醛固定后,行組織學(xué)切片檢測(cè)。結(jié)果:免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)發(fā)現(xiàn),對(duì)照組及退變組的椎間盤組織均有Syndecan-4蛋白的表達(dá),但是退變組Syndecan-4表達(dá)明顯高于對(duì)照組。退變組標(biāo)本Syndecan-4的平均光密度值也要高于對(duì)照組標(biāo)本,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。RT-PCR結(jié)果也顯示,退變組椎間盤內(nèi)Syndecan-4的m RNA表達(dá)要明顯高于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:Syndecan-4在退變程度較高的椎間盤內(nèi)高表達(dá),其可能參與椎間盤退變的過(guò)程。通過(guò)對(duì)Syndecan-4的研究,可以為將來(lái)在分子生物水平上治療腰椎間盤退變提供參考。第二部分Syndecan-4對(duì)人髓核細(xì)胞生物學(xué)行為的影響目的:研究Syndecan-4表達(dá)的變化,對(duì)于髓核細(xì)胞形態(tài)和增殖能力,以及對(duì)髓核細(xì)胞功能的影響,為后續(xù)細(xì)胞水平的椎間盤退變機(jī)制的研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:分別使用構(gòu)建好的Syndecan-4過(guò)表達(dá)和Syndecan-4抑制病毒轉(zhuǎn)染人類髓核細(xì)胞株,用倒置顯微鏡對(duì)這些髓核細(xì)胞進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察,記錄細(xì)胞形態(tài)的不同變化。通過(guò)CCK-8法分別檢測(cè)不同組別細(xì)胞的增殖情況。提取細(xì)胞總RNA和蛋白質(zhì),通過(guò)RT-PCR和Western Blot檢測(cè)髓核相關(guān)功能因子等的m RNA和蛋白水平。結(jié)果:不論在Syndecan-4過(guò)表達(dá)以及抑制情況下,髓核細(xì)胞的形態(tài)并沒(méi)有出現(xiàn)明顯的變化。CCK-8檢測(cè)顯示,Syndecan-4的表達(dá)變化也沒(méi)有對(duì)于髓核細(xì)胞的增殖能力產(chǎn)生明顯影響。Syndecan-4過(guò)表達(dá)后,Aggrecan、Collagen II和SOX-9的蛋白和m RNA水平均降低,而Collagen X蛋白及m RNA水平則表達(dá)升高。在Syndecan-4抑制的情況下結(jié)果恰恰相反。結(jié)論:Syndecan-4的表達(dá)變化并不影響髓核細(xì)胞的形態(tài)和增殖能力,但可以影響髓核細(xì)胞的功能,參與了椎間盤髓核細(xì)胞的退變過(guò)程。Syndecan-4的過(guò)表達(dá)可以促進(jìn)髓核細(xì)胞的退行性改變。第三部分Syndecan-4對(duì)JNK/p53通路的影響目的:研究Syndecan-4對(duì)JNK通路以及下游的p53通路的影響,以及在髓核細(xì)胞退變過(guò)程中發(fā)揮作用。方法:在Syndecan-4過(guò)表達(dá)和抑制的髓核細(xì)胞株檢測(cè)JNK及p JNK蛋白的水平,以及p53蛋白及其靶基因mdm2和p21的水平。通過(guò)外源性的過(guò)表達(dá)p53以及阻斷JNK通路,抑制p53的表達(dá),觀察髓核細(xì)胞的相關(guān)功能因子的改變。結(jié)果:Syndecan-4過(guò)表達(dá)能顯著增加JNK蛋白的磷酸化水平和總表達(dá)水平,而抑制Syndecan-4則能明顯降低其表達(dá)水平。同樣地,Syndecan-4過(guò)表達(dá)后,髓核細(xì)胞中的p53蛋白及其靶基因mdm2和p21的表達(dá)水平明顯增加。p53過(guò)表達(dá)能顯著降低Aggrecan、Collagen II蛋白和m RNA水平。阻斷JNK通路,抑制了p53的表達(dá),髓核細(xì)胞的相關(guān)功能因子則明顯增加。結(jié)論:Syndecan-4可以激活JNK信號(hào)通路,進(jìn)而激活下游的p53信號(hào)通路,促進(jìn)髓核細(xì)胞的退變。抑制JNK信號(hào)通路的活性,下調(diào)p53的表達(dá),可以緩解髓核細(xì)胞的退變。第四部分Syndecan-4在兔椎間盤退變模型中的作用目的:建立一個(gè)兔椎間盤退變模型,探討Syndecan-4在椎間盤退變中的作用,及可能存在的相關(guān)機(jī)制。方法:選取正常體重成年新西蘭大白兔,使用18G套管針造模,造模成功后,分別注入Syndecan-4 si RNA,Control si RNA及生理鹽水。8周后處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,進(jìn)行MRI,組織學(xué)檢查及免疫組化分析。結(jié)果:退變椎間盤內(nèi)注射Syndecan-4 si RNA后,MRI檢測(cè)顯示椎間盤信號(hào)強(qiáng)度改善,明顯好于對(duì)照組(p0.05)。免疫組化結(jié)果分析表明與對(duì)照組相比,椎間盤組織Collagen II含量明顯增加,JNK和p53陽(yáng)性表達(dá)明顯減少(p0.05)。結(jié)論:椎間盤內(nèi)注射Syndecan-4 si RNA能延緩其退變,其機(jī)制主要是通過(guò)抑制Syndecan-4的生成,抑制JNK/p53途徑而實(shí)現(xiàn)的。
[Abstract]:The expression of Syndecan - 4 in the nucleus pulposus of lumbar intervertebral disc was studied . The results showed that the expression of Syndecan - 4 was significantly higher than that in the control group . The results showed that Syndecan - 4 could significantly decrease the expression of p53 protein and its target gene mdm2 and p21 . The results showed that Syndecan - 4 could significantly decrease the expression of p53 protein and its target gene mdm2 and p21 . The results showed that Syndecan - 4 could significantly decrease the expression of p53 protein and its target gene mdm2 and p21 .
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R681.5

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4 劉q，

本文編號(hào)：2057635