本文選題：兔 + 軟骨損傷��； 參考：《河北醫(yī)科大學》2015年碩士論文

【摘要】：目的:由于關節(jié)軟骨自身無血管淋巴管及神經(jīng)分布,損傷后很難自身修復。如何處理膝關節(jié)軟骨全層損傷是骨科領域的一大難題。目前臨床有多種關節(jié)軟骨修復的手術方法:組織移植術和細胞移植術等新興技術,僅在試驗階段,因其操作復雜,價格昂貴,目前還難以在臨床廣泛開展;微骨折技術(microfracture,MF)通過刺激未分化的骨髓間充質(zhì)干細胞分化為軟骨細胞,最終修復軟骨缺損;富血小板血漿(platelet rich plasma,PRP)通過濃集的生長因子促進細胞活化、增殖等參與損傷組織的愈合。由于后兩者可以提供類似組織工程的種子細胞及生長因子,而且操作簡單,因此微骨折技術結合富血小板血漿治療軟骨損傷是很有前景的研究方向,但目前關于其研究的報道甚少。本實驗旨在觀察不同時間、微骨折技術、自體富血小板血漿以及應用微骨折技術聯(lián)合富血小板血漿對膝關節(jié)軟骨全層缺損進行修復的組織學變化,以探討采用微骨折技術聯(lián)合富血小板血漿治療關節(jié)軟骨缺損的療效,從而為臨床工作提供實驗理論依據(jù)及指導意見。方法:1實驗分組及模型制備:新西蘭大白兔48只,進行隨機分組,為A、B、C、D四組每組各12只。于兔右膝股骨內(nèi)側髁負重區(qū)建立全層軟骨缺損的模型。A組:軟骨缺損區(qū)不予處理;B組:關節(jié)內(nèi)注射自體富血小板血漿;C組:軟骨缺損區(qū)行微骨折術;D組:軟骨缺損區(qū)行微骨折術并在膝關節(jié)內(nèi)注射自體富血小板血漿。2采血:B與D組均于兔耳緣靜脈取7-9ml靜脈血,其中5ml注入肝素鋰抗凝的真空采血管中,2 ml注入EDTA-K2抗凝真空采血管中,已備用。3自體PRP的制備:當中5ml靜脈血進行二次離心,即第一次離心以2000r/min,離心10min,第二次離心轉速時間均同上,制備PRP約0.5ml,術中注射關節(jié)腔內(nèi)。4血小板計數(shù):將EDTA-K2抗凝真空采血管中2ml靜脈血放入血細胞分析儀中進行血小板計數(shù),然后同樣二次離心制備PRP,再將PRP進行血小板計數(shù),驗證制備出的PRP是否符合實驗要求。5觀察指標:術后8、12周每組隨機處死6只實驗動物,其中隨機5只切開暴露右膝,對其進行大體觀察并對其進行大體評價,隨后對損傷修復部位標本進行取材制成組織切片并行HE和甲苯胺藍染色,另一組織標本行電鏡(scanning electron microscope,SEM)制片。組織學制片完成后分別對標本行光鏡和電鏡觀察各組并對其進行相應組織學評價。結果:1大體觀察:術后8周:A組:缺損區(qū)修復組織未能平整修復軟骨缺損,缺損區(qū)與周邊正常軟骨邊界清晰;B組:缺損區(qū)修復組織修復軟骨缺損較平整,缺損區(qū)與周邊正常軟骨邊界較模糊;C組:缺損區(qū)修復組織修復軟骨缺損較平整,缺損區(qū)與周邊正常軟骨邊界較模糊;D組:缺損區(qū)修復組織修復軟骨缺損較平整,缺損區(qū)與周邊正常軟骨邊界模糊。術后12周:A組:缺損區(qū)修復組織未能平整修復軟骨缺損,缺損區(qū)仍可見明顯凹凸不平;B組:缺損區(qū)修復組織未能平整的修復軟骨缺損,修復區(qū)與周邊正常軟骨邊界清晰;C組:缺損區(qū)修復組織修復軟骨缺損較平整,修復區(qū)與周邊正常軟骨邊界較清晰;D組:缺損區(qū)修復組織平整修復軟骨缺損,修復區(qū)與周邊正常軟骨邊界迷糊,與周圍的軟骨色澤相近。2組織學觀察:術后8周:A組顯微鏡下觀察可見軟骨缺損區(qū)與正常軟骨區(qū)邊界明顯存在較大裂隙,新生細胞排列紊亂;B組顯微鏡下觀察軟骨缺損區(qū)細胞增生較為旺盛且豐富,排列有方向性;C組顯微鏡下觀察軟骨缺損區(qū)軟骨細胞增生旺盛與正常軟骨組織交界存在一定裂隙;D組顯微鏡下觀察軟骨缺損區(qū)細胞增生旺盛且豐富,排列有方向性,少部分新生軟骨近似透明軟骨。術后12周:A組顯微鏡下觀察可見軟骨缺損區(qū)細胞增生旺盛排列紊亂生,增生組織基本為纖維結締組織,未見明顯的軟骨組織增生;B、C兩組顯微鏡下觀察軟骨損傷區(qū)細胞增生旺盛且豐富,排列有方向性,交界區(qū)模糊,整合良好,未見明顯呈簇狀分布的增生區(qū)域大量纖維結締組織,有少量細胞向透明軟骨細胞分化;D組顯微鏡下觀察軟骨損傷區(qū)細胞增生旺盛且豐富,排列有方向性,部分新生軟骨近似透明軟骨。3掃描電鏡觀察:正常軟骨:可見關節(jié)軟骨表面平坦,未見表面存在扭曲和皺縮紋理。造模后軟骨:正常軟骨區(qū)與缺損區(qū)可見明顯階梯狀改變,正常軟骨區(qū)規(guī)整平滑,未出現(xiàn)皺縮紋理,缺損區(qū)表面可見凹凸不平,猶如不平整的坑洼路面。術后12周D組軟骨:電鏡下觀察可見交界區(qū)存在裂隙,缺損區(qū)修復組織靠近前叉韌帶側略顯規(guī)整。結論:1微骨折技術、富血小板血漿及二者聯(lián)合應用均能有效的促進軟骨全層缺損的修復作用。2單獨應用微骨折技術或富血小板血漿12周組相比8周組并未有進一步改善甚至出現(xiàn)退變。3微骨折技術結合富血小板血漿12周組相比8周組未發(fā)生退變,并且達到比較良好的修復效果,是一種修復全層軟骨損傷的有效方法。
[Abstract]:Objective : To study the effect of microfracture technique combined with platelet rich plasma ( PRP ) on articular cartilage defects . The results showed that the repairing tissue of the defect area could repair the defect of cartilage defect , the defect area and the peripheral normal cartilage boundary were more blurred . The results showed that the defect area repaired the tissue to repair the defect of cartilage , the defect area was more blurred with the peripheral normal cartilage . In group D , the proliferation of articular cartilage was observed under the microscope of group D . There were no significant changes in the area of articular cartilage . The results showed that there was no further improvement or even retrogression in the normal cartilage area .

【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R687.3

【參考文獻】

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1 高改霞;衛(wèi)小春;李凱;衛(wèi)建平;;大鼠膝關節(jié)軟骨不同染色方法的差異[J];中國組織工程研究與臨床康復;2010年24期

2 段王平;孫振偉;衛(wèi)小春;;關節(jié)軟骨中最基本的解剖功能結構:軟骨單位(英文)[J];中國組織工程研究與臨床康復;2010年24期

3 倪磊,呂厚山;修復膝關節(jié)軟骨缺損的關節(jié)鏡技術——微骨折技術[J];中國微創(chuàng)外科雜志;2005年05期

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本文編號：1789909